[发明专利]一种斑唇马先蒿中六种抗氧化活性成份的筛选及分离方法

权利要求书

1.一种斑唇马先蒿中六种抗氧化活性成份的筛选及分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、提取：将斑唇马先蒿全草干燥后粉碎，再进行筛选，并在第一预定温度下用乙醇溶液回流提取，将提取液减压浓缩后得到粗提物；

S2、富集：将提取步骤中得到的粗提物用去离子水溶解后，再用乙酸乙酯溶液萃取除去小极性化合物，并将剩余部分进行过柱操作，用不同浓度的乙醇溶液对分离柱进行洗脱，得到洗脱液，将所述洗脱液减压浓缩，以得到含有目标成分的富集物；

S3、分离纯化：(1)、采用在线DPPH-HPLC抗氧化活性成份筛选方法从斑唇马先蒿富集物中筛选出6个具有明显抗氧化活性的化合物；

其中，在线抗氧化筛选条件，采用Agilent 1100(250×4.6mmi.d.，5 μm)反相色谱柱，流动相为甲醇溶液，甲醇的质量浓度为45-50%，梯度洗脱时间为0-45min，流动相流速为1ml/min，检测波长330nm，DPPH溶液用浓度25μg/ml的甲醇溶解，流动相流速为0.45ml/min，检测采用Agilent 1260，DPPH反应环长度15m，检测波长为517nm；

(2)、采用高速逆流色谱仪分离纯化出了这6种高纯度单体化合物：boschnaloside、alyssonoside、leucosceptoside A、isoverbascoside、leucosceptoside B和verbascoside；

其中，在通过高速逆流色谱仪进行分离时，在第二预定温度采用乙酸乙酯- 正丁醇-水容积系统进行洗脱。

2.根据权利要求1所述的一种斑唇马先蒿中六种抗氧化活性成份的筛选及分离方法，其特征在于：所述提取步骤中，筛选时，选用筛孔范围为20-100目筛，且斑唇马先蒿全草与乙醇溶液的料液比为1:3-1:30，且使用乙醇溶液中乙醇的质量浓度为0%-90%，且第一预定温度为20℃-80℃，且提取次数为1-5次，每次提取0.5h-3h。

3.根据权利要求1所述的一种斑唇马先蒿中六种抗氧化活性成份的筛选及分离方法，其特征在于：所述富集步骤中，使用乙酸乙酯萃取的次数为3-10次，所述分离柱采用非极性大孔树脂柱，所述非极性大孔树脂柱包括D101型大孔树脂、AB-8型大孔树脂、D3520型大孔树脂和X-5型大孔树脂。

4.根据权利要求1所述的一种斑唇马先蒿中六种抗氧化活性成份的筛选及分离方法，其特征在于：所述富集步骤中，所述乙醇溶液的体积是所述分离柱中柱床的体积的5倍-20倍。

5.根据权利要求1所述的一种斑唇马先蒿中六种抗氧化活性成份的筛选及分离方法，其特征在于：所述分离纯化步骤中，所述乙酸乙酯-正丁醇-水体系中乙酸乙酯、正丁醇、水的体积比为10-15:2-5:8-10，且第二预定温度为20℃-50℃，且高速逆流色谱仪的转速为500-1000r/min。