[发明专利]核酸分子CTL4HSH2、其制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于细胞生物学和医药领域，具体而言，本发明涉及一种核酸分子及其制备方法和应用。

背景技术

肿瘤是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的异常病变。我国的肿瘤病例数相当庞大，有资料显示占全世界病例数的55%。肿瘤疾病现已上升为世界第2号"杀手"，其死亡人数仅次于心血管病。

良性肿瘤对机体的影响较小，主要表现为局部压迫和阻塞症状。恶性肿瘤由于分化不成熟、生长较快，浸润破坏器官的结构和功能，并可发生转移，因而对机体影响严重。恶性肿瘤除可引起与上述良性肿瘤相似的局部压迫和阻塞症状外，还可有发热、顽固性疼痛，晚期可出现严重消瘦、乏力、贫血和全身衰竭的状态。

近几年来，国外医学界对于肿瘤疾病的发病机理在细胞基础上又有了新的认识。 基于对肿瘤发病机制的进一步理解，人们利用各种途径来研制和开发能够特异，有效地杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无毒性的药物。 目前，对于癌症的治疗仍以化疗及放疗为首选，两者虽对肿瘤的治疗取得了相当的疗效，但由于缺乏对肿瘤细胞的特异性因而具有较大的毒副作用以及某些肿瘤细胞对化疗和放疗处理的不敏感，因此在很大程度上限制了它们在临床中的应用。 近年来，为了开发出能特异性地杀伤癌细胞而对正常细胞无毒负作用的药物，人们对癌症的发病机制从细胞,分子水平上的研究予以高度重视和巨额投资。例如，“结直肠癌”（CRC）在肿瘤中向来有“富贵病”之称,表明其与人们的生活习惯有着密切的联系。在上海,随着生活水平的提高,结直肠癌的发病率已跃居常见恶性肿瘤的第二位,仅次于肺癌。据复旦大学附属肿瘤医院资料统计,近几年结直肠癌手术量连年攀升,2007年该院结直肠癌手术量近900例,2008年已突破千例,达到了1027例。研制能特异性地杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无毒副作用的药物或者化合物一直是本领域的热点。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用于抑制体外细胞CTL4基因表达的核酸分子。通过制备、应用该核酸分子抑制体外CTL4基因的表达，从而达到维持目标细胞正常生理状态的效果。

本发明提供了一种新的核酸分子，它具有抑制体外细胞CTL4基因表达的活性；

并且

其抑制的目标元件包括SEQ ID NO 1 所示的序列。

更好的，目标元件具有SEQ ID NO 1 所示的序列。

本发明还提供了一种重组载体，它包含上述核酸分子。

其中，A、T、G和C分别是腺嘌呤核苷酸、胸腺嘧啶核苷酸、鸟嘌呤核苷酸和胞嘧啶核苷酸。

在本发明中，术语“CTL4HSH2”指具有抑制血管CTL4表达活性、并且抑制的目标元件包括SEQ ID NO 1 所示序列的核酸分子。该术语还包括目标元件的序列与SEQ ID NO 1的同源性至少90%的核酸分子。

该术语还包括在目标元件5’和/或3’端添加数个(通常为5个以内，较佳地为3个以内)核苷酸，或者3‘端加入若干dT（脱氧胸苷）后形成的序列。

在本发明中，可选用本领域已知的各种载体，如市售的载体。比如，选用市售的载体，然后将含有本发明CTL4HSH2所对应的DNA序列可操作地连于表达调控序列，可以形成重组载体。例如，可以采用慢病毒、腺病毒或者森林脑炎病毒表达系统(Semliki Forest Virus)。慢病毒（Lentivirus）属于逆转录病毒亚属,以人类免疫缺陷病毒(human immunod efficiency virus, HIV)为代表。慢病毒不仅具有感染分裂靶细胞并整合其基因组中，尤其是具有感染包括神经元细胞、巨噬细胞、肝细胞、心肌细胞和干细胞等在内的多种非分裂细胞能力，因而，慢病毒载体已作为基因转移的有效工具，被广泛应用于基因功能尤其是基因治疗的研究。

另一方面，本发明提供了一种抑制体外细胞CTL4基因表达的试剂盒，它包括上述核酸分子。

较好的，所述的核酸分子的序列如SEQ ID NO 2或者SEQ ID NO 3所示。

例如，它具有序列如SEQ ID NO 2所示的核酸分子。

或者，它具有序列如SEQ ID NO 3所示的核酸分子。

更好的，它具有序列如SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3所示的核酸分子。