[发明专利]检测肿瘤相关的50个热点突变基因的捕获文库和试剂盒

权利要求书

1.一种肿瘤相关突变基因的捕获文库的构建方法，其特征在于：包括筛选出的207个突变基因，其基因名称和染色体坐标信息为：

还包括扩增上述207个突变基因的引物对，其碱基序列如SEQ ID NO.1～414所示；

利用上述的引物，用标化的人基因组DNA作为模板进行PCR扩增、纯化、分别定量后，均一等量混合207个PCR产物，将混合的PCR产物通过进行片段 化处理，获得大小为70-130bp的DNA片段 ，通过表面带有链霉亲和素标记的磁珠来分离纯化带有生物素标记的含有目标基因DNA片段 ，从而获得带有生物素标记的捕获文库。

2.根据权利要求1所述的肿瘤相关突变基因的捕获文库的构建方法，其特征在于：所述进行片段 化处理的方法为超声波打断法。

3.根据权利要求1所述的肿瘤相关突变基因的捕获文库的构建方法，其特征在于：所述PCR扩增体系为：

PCR扩增条件为：

95℃、5min；95℃、30s，55℃、30s，72℃、30s，35个循环；72℃、10min；4℃、∞。

4.利用权利要求1所述方法获得的肿瘤相关突变基因的捕获文库。

5.利用权利要求4所述的捕获文库制备的肿瘤相关突变基因的检测试剂盒。

6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于：包括以下试剂：

建库试剂：KAPA Hyper Prep Kit Illumina platforms

封闭试剂：COT DNA、封闭引物

杂交试剂：Hybridiation缓冲液

探针：权利要求4所述的杂交捕获文库

生物素亲和磁珠：Invitrogen MyOneTM Streptavidin T1

洗脱试剂：缓冲液1×SSC,0.1％SDS和缓冲液0.1×SSC,0.1％SDS；

富集试剂：KAPA HiFi HotStart ReadyMix，Post-LM-PCR Oligos 1&2,5μM。