[发明专利]一种快速检测异鳞蛇鲭和棘鳞蛇鲭源性成分的方法

权利要求书

1.一种快速检测异鳞蛇鲭和棘鳞蛇鲭源性成分的方法，其特征为，实时荧光PCR检测异鳞蛇鲭和棘鳞蛇鲭源性成分的引物和探针，分别为：

实时荧光PCR检测异鳞蛇鲭源性成分的引物和探针，分别为：上游引物P1：TCCCTCGAATGAATAACATA，下游引物P2：CTCCTGAAGAGGCTAATAG，带有荧光染料的探针序列为：TGACTTCTGCCTCCATCCTTCC；

实时荧光PCR检测棘鳞蛇鲭源性成分的引物和探针，分别为：上游引物P1：CTCCTCCTATTATCCCTG，下游引物P2：CGAAGAAGGTTGTGTTTA，带有荧光染料的探针序列为：TTACAATGCTCCTCACAGACCGAA。

2.根据权利要求1所述的一种快速检测异鳞蛇鲭和棘鳞蛇鲭源性成分的方法，其特征在于：检测异鳞蛇鲭源性成分探针的荧光染料为：5‘端为FAM标记，3’端为TAMRA标记；检测棘鳞蛇鲭源性成分探针的荧光染料为：5‘端为VIC标记，3’端为TAMRA标记。

3.根据权利要求1所述的一种快速检测异鳞蛇鲭和棘鳞蛇鲭源性成分的方法，其特征在于如下步骤：

1)提取待检样品基因组DNA；

2)以所提取的DNA作为模板，加入权利要求1所述的引物对和荧光染料标记的探针以及酶反应液进行实时荧光PCR反应，记录样品反应的Ct值。

4.根据权利要求3所述的一种快速检测异鳞蛇鲭和棘鳞蛇鲭源性成分的方法，其特征在于：将检测异鳞蛇鲭和棘鳞蛇鲭的上游引物、下游引物和探针稀释至10μmol/L，然后等体积合并为混合引物(探针)，所述的实时荧光PCR反应体系为：

5.根据权利要求4所述的一种快速检测异鳞蛇鲭和棘鳞蛇鲭源性成分的方法，其特征在于：所述的实时荧光PCR反应条件为95℃10min，1个循环；95℃15s，58℃30s，40个循环。

6.根据权利要求3、4和5所述的一种快速检测异鳞蛇鲭和棘鳞蛇鲭源性成分的方法，其特征在于：所述的实时荧光PCR方法还设有空白对照、阴性对照、阳性对照，判定标准为：

空白对照：以ddH₂O为模板，按照权利要求2和3所述条件，进行实时荧光PCR反应，FAM和VIC通道检测Ct值大于或等于40；

阴性对照：以非异鳞蛇鲭和棘鳞蛇鲭基因组DNA为模板，按照2和3所述条件，进行实时荧光PCR反应，FAM和VIC通道检测Ct值大于或等于40；

阳性对照：以含有异鳞蛇鲭和棘鳞蛇鲭基因组DNA为模板，按照2和3所述条件，进行实时荧光PCR反应，FAM和VIC通道检测Ct值大于或等于40检测Ct值小于或等于36；

待测样品异鳞蛇鲭和棘鳞蛇鲭源性基因FAM和(或)VIC通道检测Ct值大于或等于40，阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常者，判定该样品未检出异鳞蛇鲭和(或)棘鳞蛇鲭源性成分；

待测样品异鳞蛇鲭和棘鳞蛇鲭源性基因FAM和(或)VIC通道检测Ct值小于或等于36，阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常者，判定该样品检出异鳞蛇鲭和(或)棘鳞蛇鲭源性成分；

待测样品异鳞蛇鲭和棘鳞蛇鲭源性基因FAM和(或)VIC通道检测Ct值在36-40之间，重做实时荧光PCR扩增，再次扩增后结果Ct值大于40且阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常，判定该样品未检出异鳞蛇鲭和(或)棘鳞蛇鲭源性成分；再次扩增后结果Ct值仍小于40且阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常，判定该样品检出异鳞蛇鲭和(或)棘鳞蛇鲭源性成分。