[发明专利]一种红外线‑固定化酶协同酶解蛋白质的方法

权利要求书

1.一种蛋白质酶解的方法，其特征在于，其包括：在红外线辐射下利用温敏固定化酶微球对蛋白质进行酶解。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

(1)将待酶解的蛋白质样品进行热变性处理；

(2)在红外线辐射下，采用温敏固定化酶微球对步骤(1)得到的溶液进行酶解反应，当反应溶液的温度升至45-65℃时，关闭红外线；

(3)将反应溶液的温度降至5-25℃，终止酶解反应，分离温敏固定化酶微球与酶解产物溶液，收集酶解产物溶液。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述红外线的功率为50-400W，波长为2.5-20μm；

优选地，所述温敏固定化酶微球的载体材料是由N-异丙基丙烯酰胺与丙烯酸或甲基丙烯酸通过共聚反应形成的，优选由N-异丙基丙烯酰胺与丙烯酸通过共聚反应形成；

优选地，所述温敏固定化酶微球的固定化酶为固定化胰蛋白酶或固定化糜蛋白酶，优选为固定化胰蛋白酶。

4.如权利要求1-3之一所述的方法，其特征在于，所述温敏固定化酶微球的粒径为0.5-200μm，优选为1-100μm，更优选为1-50μm；

优选地，所述温敏固定化酶微球的临界相转变温度为32-45℃，优选为33-43℃，更优选为35-40℃。

5.如权利要求2-4之一所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述热变性处理前还包括：将待酶解的蛋白质样品溶解于碱性溶液中；

优选地，所述碱性溶液选自碳酸氢铵缓冲液、Tris-HCl缓冲液或尿素溶液中的任意一种，优选为尿素溶液；

优选地，所述碱性溶液的摩尔浓度为50-200mmol/L。

6.如权利要求2-5之一所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述热变性处理过程为：在红外线辐射下，于85-95℃水浴变性1-5min；

优选地，步骤(1)所述待酶解的蛋白质样品体积为1-20mL，优选为1-10mL。

7.如权利要求2-6之一所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述酶解反应中酶与待测蛋白质样品的质量比为1:1-1:40，优选为1:1-1:20；

优选地，所述待测蛋白质样品的质量浓度为100ng/mL-5mg/mL，优选为0.1μg/mL-1mg/mL；

优选地，所述反应溶液的体积为1-50mL；

优选地，所述酶解反应的时间为0.5-5min。

8.如权利要求2-7之一所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述终止酶解反应的温度为5-25℃，优选为5-20℃，更优选为5-10℃。

9.如权利要求1-8之一所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)将待酶解的蛋白质样品在红外线辐射下，于85-95℃水浴变性1-5min；

(2)在红外线辐射下，采用温敏固定化酶微球对步骤(1)得到溶液进行酶解反应，当反应溶液的温度升至45-65℃时，关闭红外线；所述酶解反应中酶与待测蛋白质样品的质量比为1:1-1:40；

(3)将反应溶液的温度降至5-25℃，终止酶解反应，分离温敏固定化酶微球与酶解产物溶液，收集酶解产物溶液。

10.红外线-温敏固定化酶微球在蛋白质酶解中的用途，其特征在于，在红外线辐射下利用温敏固定化酶微球对蛋白质进行酶解；

优选地，所述温敏固定化酶微球的载体材料是由N-异丙基丙烯酰胺与丙烯酸或甲基丙烯酸通过共聚反应形成的，优选由N-异丙基丙烯酰胺与丙烯酸通过共聚反应形成；

优选地，所述温敏固定化酶微球的固定化酶为固定化胰蛋白酶或固定化糜蛋白酶，优选为固定化胰蛋白酶。