[发明专利]一种O-取代羟胺荧光衍生化试剂的制备与纯化方法

权利要求书

1.一种O-取代羟胺类荧光衍生化试剂O-(ω-(9H-咔唑-9-基)烷基)羟胺的制备与纯化方法，其主要步骤有：

a)中间体I的合成

将咔唑溶于反应溶剂中，先加入α，ω-二卤代烷烃，再加入相转移催化剂四正丁基溴化胺，搅拌均匀后缓慢滴入50％的KOH水溶液，滴加完毕于30～90℃下搅拌反应2～6h；反应完成后，减压除去未反应的溶剂得固体，用水洗后过滤，所得产物烘干即得中间体I；

其中α，ω-二卤代烷的量为咔唑物质的量的3-20倍；四正丁基溴化胺的量为咔唑物质的量的0.01-0.2倍；50％的KOH水溶液为质量浓度，用量为咔唑质量的2-10倍；

b)中间体II的合成

将步骤a)得到的中间体I用二甲基甲酰胺溶解后加入N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二酰亚胺和催化剂碳酸钾，60-75℃下反应2-10h；反应结束后，萃取，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，经柱层析纯化得白色固体即为中间体II的纯品；

其中N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二酰亚胺和碳酸钾的量都为咔唑物质的量的1-3倍；

c)O-(ω-(9H-咔唑-9-基)烷基)羟胺的合成

将步骤b)得到的中间体II的纯品用乙醇溶解之后与水合肼加热回流反应0.5-2小时，减压除去反应液中未反应的肼和溶剂乙醇，即得O-(ω-(9H-咔唑-9-基)烷基)羟胺粗品；

d)O-(ω-(9H-咔唑-9-基)烷基)羟胺的纯化

向步骤c)得到的O-(ω-(9H-咔唑-9-基)烷基)羟胺粗品中加少量水和氯仿，加盐酸使水相呈酸性，会有白色蓬松固体析出，过滤可得O-(ω-(9H-咔唑-9-基)烷基)羟胺的盐酸盐；取盐酸盐溶于水，加氨水使溶液呈碱性，使O-(ω-(9H-咔唑-9-基)烷基)羟胺游离成为羟胺的形式，用氯仿萃取，氯仿层用无水硫酸钠干燥，过滤后减压除净氯仿即得O-(ω-(9H-咔唑-9-基)烷基)羟胺的纯品。

2.按权利要求1所述的制备与纯化方法，其特征在于步骤a)所述的α，ω-二卤代烷烃为C2-C6的直链烷烃，其α，ω端可为双氯同时取代、双溴同时取代、或一氯一溴取代。

3.按权利要求1所述的制备与纯化方法，其特征在于步骤a)中所用的反应溶剂可直接用α，ω-二卤代烷烃为溶剂，也可选用四氢呋喃、2-丁酮、二氧六环、甲苯作为溶剂。

4.按权利要求1所述的制备与纯化方法，其特征在于步骤b)中萃取所用的溶剂为乙酸乙酯、氯仿或乙醚中的一种。

5.按权利要求1所述的制备与纯化方法，其特征在于步骤b)所述的柱层析法，固定相为100～200目的硅胶，以体积比为20∶1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱溶剂洗脱杂质，以乙酸乙酯为洗脱溶剂洗脱中间体II。

6.按权利要求1制备的O-(ω-(9H-咔唑-9-基)烷基)羟胺用作液相色谱荧光衍生化试剂，用于分析醛类化合物或含醛基的糖、蛋白质、抗体、核酸。