[发明专利]遗传性乳腺癌与卵巢癌BRCA1/2基因热点突变位点检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，涉及遗传性乳腺癌与卵巢癌BRCA1/2基因热点突变位点检测试剂盒，本试剂盒用于检测遗传性乳腺癌与卵巢癌BRCA1/2基因是否发生热点突变。

背景技术

现有技术公开了乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，占我国全身各种恶性肿瘤的7％～10％。据调查显示，在乳腺癌患者人群中，遗传性乳腺癌占5％～15％；有资料显示，有乳腺癌家族史的直系亲属，只要体内测出体内检测出BRCA1或BRCA2阳性，未来患乳腺癌的可能性达80％，但如果针对该人群提前进行化学预防，通过目前的内分泌调节剂及其他有效药物，则有望使该高危人群的发病率相对减少38％-50％。业内已有研究公开了一种通过检测高危人群体内是否存在乳腺癌遗传基因，从而对症使用化学药物加以预防乳腺癌的方法，使遗传性乳腺癌患者的发病率相对减少。

1995年国外有科学家首次克隆乳腺癌和卵巢癌敏感基因BRCA1和BRCA2。该两个基因能编码具有多重功能的蛋白，其突变表型往往具有诱发乳腺癌和卵巢癌的趋向。目前所知BRCA1和BRCA2与同源重组、DNA损伤修复、胚胎生长、转录调控等均有关，其中，尤以两者在DNA损伤修复、同源重组和转录调控中的功能最为显著和重要，这些功能的确定将有助于探讨和阐明BRCA1和BRCA2的肿瘤抑制功能及其机理，这正是近年来有关研究者致力于研究BRCA1和BRCA2的目的所在。

自2005年起,基因检测技术在肿瘤诊断领域的应用正在逐步扭转美国肿瘤患者的生存局面，据报道,美国已有超过500万人做基因检测，使得一些重大慢性病治愈率大幅提高，如家族型肠癌的发病率降低了90％，死亡率降低了70％；英国超过200万人做了基因检测，目前基因检测已成为该国人身保险必选项目。

2011年美国CA:A Cancer Journal for Clinicians杂志(2010年影响因子94.262)公布的最新统计数据显示，美国2011年预计将有230480例女性罹患乳腺癌，占女性新发恶性肿瘤的30％，排名女性恶性肿瘤发病率第一位。在我国的统计显示，女性乳腺癌的发病率呈逐年上升趋势。有研究者认为大约5％的乳腺癌是由于基因突变引起的，其中肿瘤抑制基因BRCA1和BRCA2与乳腺癌发病的关系较为密切。

基于现有技术的现状和基础，本申请的发明人拟提供遗传性乳腺癌与卵巢癌BRCA1/2基因热点突变位点检测试剂盒。进一步通过遗传性乳腺癌基因(BRCA1/2)检测热点突变位点情况，建立中国人群在该疾病中的基因信息情况数据库，为预测中国人群该疾病的易感风险，从而指导早期筛查及预防提供有效措施

发明内容

本发明的目的是基于现有技术的现状，提供一种遗传性乳腺癌与卵巢癌BRCA1/2基因热点突变位点检测试剂盒，尤其是一种采用DNA测序技术检测遗传性乳腺癌基因BRCA1/2是否存在热点位点突变的试剂盒。本发明拟通过检测热点突变，预期获得中国人群常见热点突变并与该疾病进行相关关联分析，进而建立该疾病早期筛查判断标准及体系。

本发明的遗传性乳腺癌与卵巢癌BRCA1/2基因热点突变位点检测试剂盒主要包括以下成分：

(1)BRCA1/2基因热点位点外显子区PCR扩增与测序引物14对，引物序列如表1所示；

(2)常规PCR扩增试剂，如dNTP、Taq DNA聚合酶等；

(3)常规PCR产物纯化试剂，如SAP酶、ExoI酶等；

(4)常规DNA测序试剂，如BigDye mix、EDTA溶液、乙醇溶液、HI-DI溶液等。

表1 BRCA1/2基因热点位点外显子区的PCR扩增与测序引物序列

本发明中，所述引物序列扩增出的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明通过下述方法检测遗传性乳腺癌基因BRCA1/2是否存在热点位点突变：

(1)提取样本的基因组DNA；

(2)BRCA1/2基因PCR扩增

针对BRCA1/2基因热点位点外显子区按表1所述引物进行PCR扩增；每个反应体系为总体积16u 1，包含Taq酶混合液7.5μL(dNTP、l0×PCR反应缓冲液、MgCl₂)、去离子水5.5μL、引物对(l0uM)1μL、基因组DNA(100ng/ul)1ul；反应条件为95℃15分钟，进行14个循环(-0.5℃/循环)的94℃30秒，63℃30秒，72℃45秒；然后进行30个循环的94℃30秒，56℃30秒，72℃45秒，最后进行72℃10分钟；

(3)PCR产物纯化