[发明专利]前列腺癌组织溯源CTC分型鉴定试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种前列腺癌组织溯源CTC分型鉴定试剂盒。

背景技术

原发灶不明的肿瘤(carcinoma of unknown primary,CUP)是指在治疗前评估中，病理证实为转移性肿瘤，但是经过详细的病史和体检，实验室检查和影像学检查，均不能确定其原发部位的肿瘤。早期播散，侵袭性强，转移方式不可预测是这类肿瘤的特征性表现。

原发灶不明转移癌约占癌症病人中的5-10％，病理来源腺癌占40％，未分化癌占40％，鳞癌占13％，其它类型的肿瘤占7％。由于病灶较小、部位隐匿或位于黏膜下等原因而不易发现；且肿瘤的生物学行为又较恶劣，较早发生转移，给临床医生带来了诊断和治疗方面非常大的难题。因为后续的治疗，不管是手术还是放疗、化疗，原发灶不同，治疗方式也会不同。转移灶虽然在别的器官上，但是它的生物学行为是和原发灶的基本相同的，所以治疗方法也要根据原发灶的不同而异。因此，确定原发病灶尤为重要，只有找到原发病灶，标本兼治，临床治愈率才能改善。

循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)是因自发或诊疗操作从实体肿瘤病灶(原发灶、转移灶)脱落，进入外周血中的各类肿瘤细胞的统称，目前认为CTCs可能是肿瘤转移的早期阶段。肿瘤细胞侵入到原发病灶的周围组织中，进入血液和淋巴管系统，形成CTCs，并转运到远端组织，再渗出，适应新的微环境，最终“播种”、“增殖”、“定植”、形成转移灶。肿瘤细胞在进入外周血循环的过程中可能发生上皮-间质转变(ETM，Epithelial-mesenchymal Transition)，EMT过程中，除了细胞形态和移动性发生改变外，细胞基因表达谱特别是上皮、间质分子标志物及其转录因子的表达也发生改变，发生EMT的肿瘤细胞间黏附改变，迁移和侵袭能力增强。根据CTCs抗原标志物的差异，目前CTCs主要可分为上皮标志物阳性表型(简称上皮细胞型)、间质标志物阳性表型(简称间质细胞型)和上皮与间质混合表型(简称上皮-间质细胞型)等。不同类型CTCs具有不同的迁移和侵袭能力。因此组织溯源CTC的分型和检测，对于原发灶不明的肿瘤患者原发病灶的确定、治疗方案设计以及预后评估具有重要的意义。

临床上肿瘤治疗的关键是早期诊断和准确分期，主要措施是去除原发病灶及阻断和控制转移病灶，所以CUP的原发灶寻找是临床医生面临的棘手问题之一，极大程度的限制了医生对疾病的诊断和治疗。由于原发病灶不明确，往往不能采取针对性的治疗方案，造成治疗效果不佳和病人预后不良。然而，目前传统的诊断方法，包括CT扫描、PET-CT检查和血清肿瘤标记物检测等往往费时、费力，需要拉网式筛查，而其检测率仅有20-50％。因此，继续一种灵敏度高、特异性强、准确性好的检测试剂盒以及检测方法，用于肿瘤原发灶的确定，帮助医生对患者的诊断和治疗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏度高、特异性强、准确性好的前列腺癌组织溯源CTC分型鉴定试剂盒，用于判断患者原发病灶是否为前列腺癌。

实现上述目的的技术方案如下。

一种前列腺癌组织溯源CTC分型鉴定试剂盒，包括针对检测目标基因mRNA的捕获探针以及信号放大系统；所述目标基因包括有前列腺癌特异性基因、上皮细胞标志基因、和间质细胞标志基因，所述前列腺癌特异性基因选自PSA、PSMA、PSAP、NKX3.1、P501S中至少两种；所述上皮细胞标志基因选自EPCAM、CDH1、CK8、CK18中的至少两种；所述间质细胞标志基因选自SURVIVIN、VIMENTIN、AKT2、TWIST1中至少两种；所述信号放大系统包括末端修饰有荧光基团的扩增探针，或包括有扩增探针和末端修饰有荧光基团的标记探针，不同种类目标基因的荧光基团互不相同；其中，

所述扩增探针连接捕获探针与荧光基团，或连接捕获探针与标记探针，所述捕获探针连接目标基因mRNA与扩增探针，每条捕获探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：与待检测的目标基因mRNA结合的特异性序列P1、间隔臂序列、P2序列，所述P2序列为不存在发夹结构、探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与P1、P4和目标基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列，针对同一类别目标基因mRNA的捕获探针的P2序列相同；