[发明专利]一种巨噬细胞培养基及培养方法

权利要求书

1.一种巨噬细胞培养基，其特征在于，含有DMEM培养基、FBS、GM-CSF、 脂多糖和白介素-14。

2.根据权利要求1所述的巨噬细胞培养基，其特征在于，所述巨噬细胞培 养基含有下述含量的下述组分：

3.根据权利要求2所述的巨噬细胞培养基，其特征在于，所述巨噬细胞培 养基含有下述含量的下述组分：

4.根据权利要求3所述的巨噬细胞培养基，其特征在于，所述巨噬细胞培 养基含有下述含量的下述组分：

5.一种巨噬细胞的培养方法，其特征在于，使用本发明巨噬细胞培养基、 微载体和摇袋式细胞培养生物反应器培养巨噬细胞。

6.根据权利要求5所述的巨噬细胞的培养方法，其特征在于，包含以下步 骤：

S1、用本发明巨噬细胞培养基重悬PBMC，使PBMC密度为0.5×10⁶-2× 10⁶cells/mL，再将其接种于培养瓶，每3-4天换液一次；培养7天后弃去上清， 加入胰酶-EDTA消化液消化至细胞完全脱落，加入3倍体积的FBS终止消化， 离心去除上清液；

S2、用本发明巨噬细胞培养基重悬细胞，调整细胞密度至5×10⁴cells/mL， 取4×10⁷个细胞与4g微载体混合，将混合液加入摇袋式细胞培养生物反应器中 在37℃、5％CO₂条件下培养；20转/分钟培养3小时，50转/分钟培养至第3天， 70转/分钟培养至第6天，每3天向反应器中添加100mL培养基；

S3、倒出反应器中的培养基，离心去除上清，PBS清洗2遍后用含有胰酶 -EDTA消化液消化5分钟，加入3倍体积的FBS终止消化，离心去除上清，用 PBS重悬沉淀，过滤收集滤液即得巨噬细胞。

7.根据权利要求5或6所述的巨噬细胞的培养方法，其特征在于，所述摇 袋式细胞培养生物反应器为25型GEwave摇袋式细胞培养生物反应器。

8.根据权利要求5或6所述的巨噬细胞的培养方法，其特征在于，所述微 载体为Cytodex-1微球载体。

9.根据权利要求8所述的巨噬细胞的培养方法，其特征在于，所述微载体 在使用前进行预处理，预处理的方法为将Cytodex-1微球载体用DMEM培养基 浸泡过夜。

10.根据权利要求6所述的巨噬细胞的培养方法，其特征在于，所述胰酶 -EDTA消化液中EDTA的质量浓度百分数为0.02％，胰酶的质量浓度百分数为 0.25％。