[发明专利]一种黄花油点草组织培养与快速繁殖的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物培养技术领域，具体涉及一种黄花油点草组织培养与快速繁殖的方法。

背景技术

黄花油点草[Tricyrtis maculata (D. Don) Machride]，是百合科（Liliaceae）油点草属（Tricyrtis）多年生草本植物，产云南、四川、贵州、陕西、甘肃、河北、河南、湖南和湖北等地。生于海拔280-2300米的山坡林下、路旁等处。其根或全草入药，名黑点草，也叫立竹根、山黄瓜、黄瓜菜、大黄瓜香、瓜米菜，其性微寒，味甘，具清热除烦、活血消肿之功效，主治胃热口渴、烦燥不安、劳伤、水肿；其花的颜色常有变化，由绿白色、淡黄色至近黄色，花被片内面的斑点由紫黑色点状小块分布到紫褐色星散地分布，具有良好的观赏价值，有待于商业化。油点草属植物在全世界约15种，国内有4种，分别为台湾油点草（T. Formosana）、油点草（T. Macropoda）、黄花油点草（T. Maculata）、紫花油点草（T. Stolonifera），目前尚未有该属植物的组织培养快速繁殖的研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种成活率高，利于实现产业化生产的黄花油点草组织培养与快速繁殖的方法。

为实现本发明之目的，采用以下技术方案予以实现：一种黄花油点草组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）黄花油点草的消毒

4月至8月之间，剪取带腋芽的茎段，先用软毛刷于自来水下轻柔刷洗，加入适量的洗洁精溶液浸泡2 min，倾倒洗洁精溶液后用流水冲洗0.5 h后，在紫外灯消毒30 min以上的超净工作台里将茎段转入70%的酒精溶液中浸泡1 min，用无菌水冲洗3次，浸泡入滴加有2滴吐温-80的0.1% HgCl₂溶液内浸泡消毒12-13 min，然后用无菌水充分浸洗3次，即可得到消完毒的外植体；

（2）腋芽的诱导

将上一步得到的的外植体，以正常的极性方向插入到装有添加NAA 0.1-0.5 g/L，6-BA 1.0-5.0 mg/L的MS基本培养基的培养瓶中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为8 g/L，活性炭的添加量为0-2.0 g/L，pH为5.8-6.0，培养基曾于121℃下高温高压灭菌20 min；接种好的培养瓶先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度为30-40 μmol/(m²·s)，光源为白色节能灯；

（3）丛生芽的诱导

待上一步培养的腋芽长出后，在紫外灯灭菌30 min的超净工作台里切下带腋芽的茎段，以正常的极性方向接种到装有添加TDZ 0-2.0 mg/L，6-BA 0-5.0 mg/L的MS基本培养基的培养瓶中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为8.0 g/L，活性炭的添加量为0.5 g/L，pH为5.8-6.0，培养基曾于121℃下高温高压灭菌20 min；先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30-40 μmol/(m²·s)，光源为白色节能灯；

（4）不定芽的增殖

将上一步诱导获得的不定芽丛切成2-3株不定芽的芽块，接种到装有添加6-BA 0-6.0mg/L，IAA 0-3.0 mg/L的MS基本培养基的培养基中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为8.0 g/L，活性炭的添加量为0.5 g/L，pH为5.8-6.0，培养基曾于121℃下高温高压灭菌20 min；先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30-40 μmol/(m²·s)，光源为白色节能灯；

（5）再生植株的生根培养