[发明专利]一种提高外源基因同源重组效率的方法在审
| 申请号： | 201610272812.0 | 申请日： | 2016-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN107326046A | 公开（公告）日： | 2017-11-07 |
| 发明（设计）人： | 韩红辉;李大力;刘明耀 | 申请（专利权）人： | 上海邦耀生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90 |
| 代理公司： | 北京中济纬天专利代理有限公司11429 | 代理人： | 谌丹 |
| 地址： | 200040 上海市闵*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 基因 同源 重组 效率 方法 | ||
1.一种提高外源基因同源重组效率的方法，包括在目的基因组中导入cas9 ，靶向目的基因的sgRNA和同源重组修复模板DNA，其特征在于，所述sgRNA介导的Cas9对目的基因组PAM序列上游的切割效率至少为15.4%。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述目的基因组的PAM序列为NGG或NAG。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述Cas9为Cas9 mRNA或Cas9蛋白。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述sgRNA和目的DNA互补的序列为17nt-22nt。
5.如权利要求4述的方法，其特征在于所述sgRNA和目的DNA互补的序列为18nt-20nt。
6.如权利要求5述的方法，其特征在于所述sgRNA和目的DNA互补的序列为18nt。
7.如权利要求1至6中任一所述的方法，其特征在于所述同源重组修复模板DNA为环状质粒或者线性化双链DNA。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于所述同源重组修复模板进行同义突变。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于所述同源重组修复模板DNA左右同源臂至少为500bp。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于所述同源重组修复模板DNA左右同源臂不对称。
11.如权利要求1至6中任一所述的方法，其特征在于所述同源重组修复模板DNA为线性化单链DNA。
12.如权利要求11所述的方法，其特征在于所述同源重组修复模板进行同义突变。
13.如权利要求12所述的方法，其特征在于所述同源重组修复模板DNA左右同源臂至少为40bp。
14.如权利要求13所述的方法，其特征在于所述同源重组修复模板DNA左右同源臂不对称。
15.如权利要求1至6中任一所述的方法，其特征在于所述目的基因组为人、老鼠、斑马鱼、细菌、果蝇、酵母、线虫或农作物细胞内的基因。
16.如权利要求7中所述的方法，其特征在于所述目的基因组为人、老鼠、斑马鱼、细菌、果蝇、酵母、线虫或农作物细胞内的基因。
17.如权利要求8中所述的方法，其特征在于所述目的基因组为人、老鼠、斑马鱼、细菌、果蝇、酵母、线虫或农作物细胞内的基因。
18.如权利要求9中所述的方法，其特征在于所述目的基因组为人、老鼠、斑马鱼、细菌、果蝇、酵母、线虫或农作物细胞内的基因。
19.如权利要求10中所述的方法，其特征在于所述目的基因组为人、老鼠、斑马鱼、细菌、果蝇、酵母、线虫或农作物细胞内的基因。
20.如权利要求11中所述的方法，其特征在于所述目的基因组为人、老鼠、斑马鱼、细菌、果蝇、酵母、线虫或农作物细胞内的基因。
21.如权利要求12中所述的方法，其特征在于所述目的基因组为人、老鼠、斑马鱼、细菌、果蝇、酵母、线虫或农作物细胞内的基因。
22.如权利要求13中所述的方法，其特征在于所述目的基因组为人、老鼠、斑马鱼、细菌、果蝇、酵母、线虫或农作物细胞内的基因。
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