[发明专利]一种检测EV71病毒IgM抗体的免疫检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种检测EV71病毒IgM抗体的免疫检测试剂盒，包括EV71病毒抗原包被的酶标板、类风湿因子吸附剂和样本稀释液。

2.根据权利要求1所述的检测EV71病毒IgM抗体的免疫检测试剂盒，其特征在于，还包括抗EV71病毒IgM抗体标准品、辣根过氧化物酶标记的抗人酶标二抗抗体溶液、浓缩洗液、底物溶液和终止液。

3.根据权利要求2所述的检测EV71病毒IgM抗体的免疫检测试剂盒，其特征在于，所述抗EV71病毒IgM抗体标准品为若干浓度不同的抗EV71病毒IgM抗体溶液，优选的用于稀释抗EV71病毒IgM抗体的液体优选地与样本稀释液相同。

4.根据权利要求2所述的检测EV71病毒IgM抗体的免疫检测试剂盒，其特征在于，所述辣根过氧化物酶标记的抗人酶标二抗抗体溶液是将辣根过氧化物酶标记的抗人酶标二抗抗体用HRP偶联物稳定剂以1:1000-1:5000的比例稀释而成，优选为辣根过氧化物酶标记的羊抗人酶标抗体溶液。

5.根据权利要求2所述的检测EV71病毒IgM抗体的免疫检测试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗液由下述组分制成：以重量计，氯化钠96.0份，氯化钾2.40份，十二水合磷酸氢二钠42.96份，磷酸二氢钾2.88份，吐温-200.05份，超纯水1000份。

6.根据权利要求2所述的检测EV71病毒IgM抗体的免疫检测试剂盒，其特征在于，所述底物溶液为TMB。

7.根据权利要求2所述的检测EV71病毒IgM抗体的免疫检测试剂盒，其特征在于，所述终止液为硫酸溶液，优选为2mol/L硫酸溶液。

8.根据权利要求1或2所述的检测EV71病毒IgM抗体的免疫检测试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液优选为含蛋白质的磷酸盐缓冲液，更优选为含BSA的磷酸盐缓冲液，还优选为含1-5％BSA的磷酸盐缓冲液，最优选为含3-5％BSA的磷酸盐缓冲液。

9.权利要求1-8任一项所述的检测EV71病毒IgM抗体的免疫检测试剂盒在检测EV71病毒抗原浓度方面的应用。

10.权利要求1-8任一项所述的检测EV71病毒IgM抗体的免疫检测试剂盒在检测EV71病毒抗原浓度方面的应用的方法，包括下述步骤：

(1)将样本稀释液与类风湿因子吸附剂按比例稀释，优选的稀释比例为10:1；

(2)将待检样本与样本稀释液按比例稀释，优选的稀释比例为1:300-1:500；

(3)将上述步骤(2)和步骤(1)获得的液体混合后静置，优选的混合比例为1:9，优选的静置时间至少15min；

(4)将步骤(3)所得的待测样本加入到EV71病毒抗原包被的酶标板中孵育、孵育后洗板，优选的孵育时间为30-60min；

(5)向步骤(4)获得的酶标板中加入辣根过氧化物酶标记的抗人酶标二抗抗体溶液并孵育、孵育后洗板，优选的孵育时间为30-60min；

(6)向步骤(5)获得的酶标板中加入底物溶液进行显色反应，然后加入终止液进行检测，于酶标仪上读取450nm处的吸光光度值。