[发明专利]一种鉴定甘蔗抗褐锈病基因位点紧密连锁的分子标记方法有效
| 申请号： | 201610271692.2 | 申请日： | 2016-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN105713989B | 公开（公告）日： | 2019-03-22 |
| 发明（设计）人： | 郭晋隆;卢运海;许莉萍;王恒波;阙友雄;刘迪;肖乃衍;陈平华 | 申请（专利权）人： | 福建农林大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350002 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴定 甘蔗 锈病 基因 紧密 连锁 分子 标记 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种用于鉴定甘蔗抗褐锈病基因位点紧密连锁的分子标记方法，其特征在于：包括如下步骤：分别以待鉴定甘蔗和“POJ2878”的基因组DNA为模板，PCR 扩增体系：2×PremixEx TaqMix PCR Buffer 12.5μL，10μmol/L引物1和引物2各0.5μL，25 ng/μL模板DNA 2μL，加灭菌双蒸水使总体积为25μL；扩增程序如下：94 ℃ 5 min ；94 ℃ 30 S，56 ℃ 30 S，72℃ 40 S，34个循环；72℃ 7 min；
将扩增的PCR产物利用限制性核酸内切酶HaeIII 进行酶切，通过琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物，确定待鉴定甘蔗对褐锈病的抗性：如果待鉴定甘蔗的酶切产物电泳条带有与POJ2878带型相同的条带，则待鉴定甘蔗为抗褐锈病甘蔗，如果待鉴定甘蔗的酶切产物电泳条带没有与POJ2878带型相同的条带，则待鉴定甘蔗为非抗褐锈病甘蔗，酶切产物经过胶回收及测序，抗性片段大小为389 bp，其余条带为非特异性扩增；
所述引物1：29-5’-TTTATAAATTACCATTAAGGACCAT-3’；引物2：417-5’-CAGCATTTAAGATGGCATAGGCGTC-3’。
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