[发明专利]表达Tim-3的外周血NK细胞在制备自然流产生物标记物中的用途

说明书

本发明属于生物技术领域，涉及表达Tim‑3的外周血NK细胞在制备自然流产生物标记物中的用途。本发明所述的NK细胞具有耐受表型与低细胞杀伤毒性，经试验证明所述的表达Tim‑3的外周血NK细胞在正常妊娠外周血的高表达，而自然流产患者这种细胞数量下降、功能紊乱；拮抗NK细胞的Tim‑3导致妊娠失败，过继转输该NK细胞亚群可挽救免疫性自然流产模型以及NK敲除所致的妊娠失败；所述的表达Tim‑3的外周血NK细胞可用于制备自然流产生物标记物，进一步作为临床不明原因自然流产的新型预测与防治靶点。

技术领域

本发明属于生物技术领域。涉及预测与防治自然流产的生物标记物，具体涉及表达Tim-3的外周血NK细胞在制备自然流产生物标记物中的用途。该自然流产的生物标记物可用于作为早期妊娠失败的预测与防治靶点。

背景技术

现有技术公开了有关妊娠结局的预测方法主要是根据孕妇的外周血HCG-β与孕酮水平，但实践中大量的证据表明孕妇外周血P水平与妊娠结局关系并不完全一致；尽管HCG-β能比较真实的反应孕妇的妊娠预后，但越来越多的临床资料表明：一旦孕妇外周血HCG下降(除了HCG-β生理性下降)，胚胎已无法挽救；另外，部分孕妇尽管持续分泌大量的HCG-β与P，但胚胎仍停止发育(或是空胚囊)；显然HCG-β与P作为检测妊娠结局的指标存在诸多的缺陷，临床实践迫切需要一个反映早孕期妊娠状态的早期预测与防治的生物指标。

研究公开了，胚胎表达父系抗原，因而可视为一种半同种移植物，作为这种半同种移植物的胚胎能够在母体内存活直至分娩实际是反应了母体对胚胎的免疫耐受。一旦这种母-胎免疫耐受被打破，将会导致妊娠失败或自然流产与妊娠并发症。自然流产是严重危害人类生殖健康的常见疾患之一，其发生率呈现逐年上升的趋势。据统计资料表明，目前，自然流产发生率高达15～40％，即便是在辅助生育技术飞速发展的今天，仍不能克服因母-胎免疫调节紊乱造成的妊娠失败，遗憾的是临床实践中仍缺乏对之有效的早期诊断与防治策略。自然流产的发生多归因于遗传、感染、内分泌、生殖道畸形等等，但临床仍有50％以上的流产尤其是反复自然流产病因不明，其中，母-胎免疫调节失衡被认为是重要原因之一；有研究显示，免疫细胞是母-胎免疫耐受的执行者与效应者，其中NK细胞在母-胎耐受中发挥至关重要的调节作用；本申请的前期研究发现，蜕膜NK细胞对母-胎耐受的建立和维持至关重要，妊娠期蜕膜NK细胞通过细胞表面分子与细胞内各种因子的作用，维持母-胎耐受与正常妊娠的进行，然而由于妊娠期蜕膜组织不易获取，用于临床诊断与防治靶点几无可能。因此，临床实践中迫切需要一个简单可靠的方法对早期自然流产的免疫学状态进行客观的评估，并能对之进行干预以达到防治自然流产挽救妊娠胚胎的目的。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供一种预测与防治自然流产的生物标记物，尤其是表达Tim-3的外周血NK细胞在用于制备自然流产生物标记物中的用途。该自然流产的生物标记物可用于作为早期妊娠失败的预测与防治靶点。

发明内容

本发明的目地是克服现有技术存在的缺陷，提供一种预测与防治自然流产的生物标记物，具体涉及表达Tim-3的外周血NK细胞在用于制备自然流产生物标记物中的用途。该自然流产的生物标记物可用于作为早期妊娠失败的预测与防治靶点。

本发明中，进行了不同妊娠状态外周血Tim-3⁺NK细胞百分率比较实验与差异分析，分析Tim-3在不同妊娠状态外周血NK细胞的表达特征及其调节情况；结果显示，Tim-3在NK细胞表达水平在不同孕期有明显差异，妊娠早期外周血NK细胞Tim-3表达明显上调，妊娠中期降至未孕期水平；妊娠早期，妊娠相关激素(主要是孕酮)与Th2型细胞因子(IL-4)参与外周NK细胞的Tim-3表达上调；