[发明专利]一种菌落总数测试片、制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种菌落总数测试片、制备方法及其在检测食品中菌落总数方面的应用。

背景技术

菌落总数是反映食品卫生质量的重要指标，用来判定食品被细菌污染的程度。菌落总数测定是我国熟肉制品、水产制品、粮食制品、即食果蔬制品、即食调味品、饮料等多类农产品和食品检测标准中的检测指标，也是食品风险预测和危害评估的重要监测项目。目前GB 4789.2《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》采用平板计数法，该方法需要进行培养基配制、灭菌、玻璃器皿清洗等工作，程序繁琐，工作量大。微生物测试片类检测产品省去了配制培养基、消毒灭菌和培养器皿的清洗处理等大量辅助性工作，计数便捷，使用起来只需要3个简单的步骤：样品制备、增殖培养和计数，是国内外进行微生物污染计数测定最好的检测产品。

现有商业化微生物测试片检测产品中，美国3M公司以冷水可溶凝胶为载体的Petrifilm^TM测试片一直走在世界前列，在世界各地使用的比较多,国产测试片产品主要是由广州绿洲生化和北京陆桥科技有限公司等研发的以无纺布为载体的测试片产品，此外还有一些测试片处于研发和小范围使用阶段。虽然这些测试片具有方便实用的突出优势，但测试片作为微生物检测的新技术仍存在一些不足，在细菌生长、菌落呈色扩散和准确计数等方面的技术瓶颈尚需有效解决。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种操作简单、价格低廉、检测准确的菌落总数冷水凝胶测试片，该测试片依次由内侧有粘性的透明塑料上层膜(如透明度高、无毒无刺激性气味、防水透气的PET硅胶膜，厚度为0.05mm～0.10mm)、带有镂空区域的塑料中层板(如硬度较好的聚丙烯塑料板或PET塑料板，厚度为 0.15mm～0.30mm)、印刷有方格的底板(如防水、防渗透的白色铜版纸，厚度为0.10mm～0.20mm)组成；以上材料耐高温的温度为130℃～150℃；塑料中层板的镂空区域为圆形、椭圆形或方形结构，镂空区域面积与中层板面积的比例范围为1：1.6～2.7，在镂空区域内填充有菌落总数显色检测培养基，透明塑料上层膜的内侧涂覆有复配冷水可溶性凝胶。

菌落总数显色检测 培养基除基础培养基胰蛋白胨、酵母浸粉、氯化钠、葡萄糖外，另加入了显色剂TTC(2,3,5-三苯基氯化四氮唑)、促生长因子丙酮酸钠、表面活性剂吐温80、甘露醇和疏松剂豆渣；其中疏松剂豆渣自己制备：将鲜豆渣置于50～60℃恒温干燥箱烘干后，磨碎，过100～120目筛。

复配冷水可溶性凝胶由瓜尔胶、聚丙烯酸钠和羧甲基维素钠组成。

菌落总数显色检测 培养基重量组份为：胰蛋白胨15～30g、酵母浸粉5～15g、氯化钠5～10g、葡萄糖1～5g、丙酮酸钠1～3g、甘露醇1～3g、吐温80 1～3mL、 TTC 0.2～0.5g、豆渣3～10g。

复配冷水可溶性凝胶重量组分为：瓜尔胶8g、聚丙烯酸钠1～2g和羧甲基纤维素钠1～2g。

本发明又一个目的是提供上述菌落总数测试片的制备方法，其步骤如下：

(1)培养基干粉制备

将胰蛋白胨15～30g、酵母浸粉5～15g、氯化钠5～10g、葡萄糖1～5g、豆渣3～10g加入到90mL蒸馏水中，加热、搅拌溶解后，再加入丙酮酸钠1～3g、甘露醇1～3g、吐温80 1～3mL搅拌溶解，调节pH至6.8～7.2，121℃高压灭菌 15～20min，冷却至45～55℃；将TTC 0.2～0.5g用10mL蒸馏水溶解后，0.22μm 条件过滤除菌后加入到前述的培养基中，搅拌混匀。

上述培养基溶液放入45～50℃无菌干燥箱中烘干，研磨成粉末，过100～120 目分子筛，备用。

(2)复配冷水凝胶制备

将冷水凝胶瓜尔胶、聚丙烯酸钠和羧甲基纤维素钠分别研磨成粉末，过 100～120目分子筛，按8：1～2：1～2重量比例充分混匀。

(3)菌落总数测试片的制备

将上层、中层及底层板材料剪裁成同样大小，采用聚丙烯酸树脂压敏胶(透明、无毒、无味、无菌)将一侧封闭粘合；

将上述复配冷水可溶凝胶粉末，均匀地涂在透明塑料上层膜的内侧有粘性的一面，厚度为0.10mm～0.20mm，然后将上述测试片在121℃条件下高压灭菌 15～20min后，取出冷却至室温。

先在中层板镂空区域对应的底板上均匀涂覆聚丙烯酸树脂压敏胶，厚度为 0.05mm～0.10mm，再将菌落总数显色检测 培养基粉末填充在中层板的镂空区域内，厚度为0.10mm～0.20mm；