[发明专利]一种肉类中沙门氏菌含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品检测领域，具体是一种肉类中沙门氏菌含量的检测方法。

背景技术

沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一，其病原就是沙门氏菌， 沙门氏菌属肠道细菌科，能够引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒。它们除可感染 人外，还可感染很多动物包括哺乳类、鸟、爬行类、鱼、两栖类及昆虫。人畜感染后可呈 无症状带菌状态，也可表现为有临床症状的致死疾，它可能加重病态或死亡率，或者降低 动物的繁殖生产力。

随着人们生活水平的提高，肉食品逐渐变为人们的日常食品，然后，人们感染沙门氏 菌的重要来源就是肉食品。为了人们健康，检测肉类中沙门氏菌的含量势在必行。目前， 沙门氏菌的检测方法主要包括培养法和免疫学检测法。培养法和免疫学检测法是根据沙门 氏菌的生长特性，采用选择性的培养基使沙门氏菌成为优势菌群，然后基于沙门氏菌的生 化特性和菌体表面抗原特性，利用生化反应和抗原-抗体反应的特异性进行沙门氏菌的 检测。这些方法大都存在操作复杂、易受干扰、难以定量检测的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肉类中沙门氏菌含量的检测方法，以解决上述背景技术中 提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种肉类中沙门氏菌含量的检测方法，步骤如下：

1)样品制备，称取适量肉类样品，使用12-15倍的生理盐水均质拍打15-20min，并 在4000-5000rmp下离心分离10-15min，过滤，取上层清液，将残渣再次加入8-10倍的生 理盐水均质拍打15-20min，并在4000-5000rmp下离心分离10-15min，过滤，取上层清液， 合并两次的上层清液，获得上层总液，备用；

2)空白样品制备，称取适量不含沙门氏菌的空白肉类样品，按照步骤1)，获取空白 上层总液，备用；

3)获取八份不同已知浓度的沙门氏菌溶液，取第一个浓度沙门氏菌菌液用无菌生理 盐水稀释10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷、10⁸倍，各取200μL沙门氏菌的稀释液分别注入到12 个培养皿中(每个稀释倍数做平行样)，将各个培养皿中的稀释液分别涂布于LB平板上， 于35～37℃培养箱中培养24h,计数每个平板上的可疑菌落数,挑取可疑菌落进行生化和血 清学鉴定验证后，得到1个已知浓度的沙门氏菌溶液。以同样的步骤对第二个浓度进行培 养分析，以此类推得到多份不同已知浓度的沙门氏菌溶液；

4)已知浓度样品的制备，称适量步骤2)制备的空白上层总液，均分为八份，并分别 加入同等体积的步骤3)制备的已知浓度的沙门氏菌溶液，获得八份已知浓度样品；

5)确定沙门氏菌与掺硼金刚石膜电极响应电流的依从关系，采用CHI660D电化学工 作站用电化学计时电流的方法快速检测沙门氏菌的浓度，以掺硼金刚石膜电极为工作电极， 铂丝电极为对电极，饱和甘汞电极为参比电极，设置工作电极的检测电位为0.9～1.15V， 电解池中为pH7.2～7.6的磷酸-磷酸盐缓冲溶液；将上述步骤4)获得的八份已知浓度样品 逐一进样，记录每次进样时掺硼金刚石膜电极的响应电泳的电流值，根据全部进样的沙门 氏菌液浓度和与其对应响应电流的电流值作曲线，得到响应电流-沙门氏菌浓度曲线，该 曲线为一直线，确定沙门氏菌与掺硼金刚石膜电极响应电流的依从关系为线性关系；

6)待测样品的检测，称取待测肉类样品，按照步骤1)，获取待测上层总液，将待测 上层总液进样，记录掺硼金刚石膜电极的响应电泳的电流值，结合步骤5)获得的响应电 流-沙门氏菌浓度曲线，得出待测肉类样品中的沙门氏菌浓度。

作为本发明进一步的方案：所述肉类包括红肉和白肉。

作为本发明再进一步的方案：所述的响应电流-沙门氏菌浓度曲线用于拟合表达掺硼 金刚石膜电极的响应电流与沙门氏菌浓度依从关系的公式，拟合得到的公式为ΔI＝Kx， 其中ΔI为计时电流变化，单位为μA，K为常数，x为沙门氏菌浓度，单位为cfu/mL。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明能够检测出肉类中沙门氏菌的含量， 大大降低了人们感染沙门氏菌的几率，有利于人们的身体健康。本发明检测方法具有操作 简单、不易受干扰、检测时间短、检测准确度高等优点。