[发明专利]一种肉类中沙门氏菌含量的检测方法

权利要求书

1.一种肉类中沙门氏菌含量的检测方法，其特征在于，步骤如下：

1)样品制备，称取适量肉类样品，使用12-15倍的生理盐水均质拍打 15-20min，并在4000-5000rmp下离心分离10-15min，过滤，取上层清液，将残 渣再次加入8-10倍的生理盐水均质拍打15-20min，并在4000-5000rmp下离心 分离10-15min，过滤，取上层清液，合并两次的上层清液，获得上层总液，备 用；

2)空白样品制备，称取适量不含沙门氏菌的空白肉类样品，按照步骤1)， 获取空白上层总液，备用；

3)获取八份不同已知浓度的沙门氏菌溶液，取第一个浓度沙门氏菌菌液用 无菌生理盐水稀释10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷、10⁸倍，各取200μL沙门氏菌的稀 释液分别注入到12个培养皿中(每个稀释倍数做平行样)，将各个培养皿中的 稀释液分别涂布于LB平板上，于35～37℃培养箱中培养24h,计数每个平板上的 可疑菌落数,挑取可疑菌落进行生化和血清学鉴定验证后，得到1个已知浓度的 沙门氏菌溶液。以同样的步骤对第二个浓度进行培养分析，以此类推得到多份不 同已知浓度的沙门氏菌溶液；

4)已知浓度样品的制备，称适量步骤2)制备的空白上层总液，均分为八 份，并分别加入同等体积的步骤3)制备的已知浓度的沙门氏菌溶液，获得八份 已知浓度样品；

5)确定沙门氏菌与掺硼金刚石膜电极响应电流的依从关系，采用CHI660D 电化学工作站用电化学计时电流的方法快速检测沙门氏菌的浓度，以掺硼金刚石 膜电极为工作电极，铂丝电极为对电极，饱和甘汞电极为参比电极，设置工作电 极的检测电位为0.9～1.15V，电解池中为pH7.2～7.6的磷酸-磷酸盐缓冲溶液； 将上述步骤4)获得的八份已知浓度样品逐一进样，记录每次进样时掺硼金刚石 膜电极的响应电泳的电流值，根据全部进样的沙门氏菌液浓度和与其对应响应电 流的电流值作曲线，得到响应电流-沙门氏菌浓度曲线，该曲线为一直线，确定 沙门氏菌与掺硼金刚石膜电极响应电流的依从关系为线性关系；

6)待测样品的检测，称取待测肉类样品，按照步骤1)，获取待测上层总 液，将待测上层总液进样，记录掺硼金刚石膜电极的响应电泳的电流值，结合步 骤5)获得的响应电流-沙门氏菌浓度曲线，得出待测肉类样品中的沙门氏菌浓 度。

2.根据权利要求1所述的肉类中沙门氏菌含量的检测方法，其特征在于， 所述肉类包括红肉和白肉。

3.根据权利要求1所述的肉类中沙门氏菌含量的检测方法，其特征在于， 所述的响应电流-沙门氏菌浓度曲线用于拟合表达掺硼金刚石膜电极的响应电流 与沙门氏菌浓度依从关系的公式，拟合得到的公式为ΔI＝Kx，其中ΔI为计时 电流变化，单位为μA，K为常数，x为沙门氏菌浓度，单位为cfu/mL。