[发明专利]一株有效降解3-苯氧基苯甲酸的米曲霉

说明书

技术领域

本发明涉及利用微生物进行环境修复或食品污染物减除的领域，具体涉及一株可降解3-苯氧基苯甲酸的米曲霉。

背景技术

3-苯氧基苯甲酸（3-phenoxybenzoicacid,3-PBA）是大多数拟除虫菊酯类农药降解的主要中间产物之一。3-PBA不仅是对真菌具有较大毒性的潜在环境污染物，也是一种雌激素类物质，具有一定的生殖毒性。已有报道表明，3-PBA相对其母体化合物拟除虫菊酯，显示了更强的生物毒性作用。与拟除虫菊酯类农药相比，3-PBA结构更为稳定，自然条件下难以降解，其半衰期远超过拟除虫菊酯类农药。而且，3-PBA在土壤中的流动性更强，能够引起其在土壤中的扩大污染。

20世纪80年代，随着高毒品种农药被禁用，拟除虫菊酯类农药以其低毒、触杀作用强等特点被广泛应用，因此其中间产物3-PBA也越来越多的残留于土壤和农畜产品中，在人体尿液中被检出残留的3-PBA达0.30-26.10μg/L。3-PBA在造成农产品二次污染的同时，也导致拟除虫菊酯类农药生物矿化作用受阻，从而阻断了该类农药彻底转化为无毒小分子物质的生物降解途径，间接地使农产品或食品中农药残留问题更加严峻，严重制约了我国现代农业的可持续发展。因此，3-PBA的降解是消除拟除虫菊酯农药污染的关键。

微生物降解法是消除有害化合物的佳选方法之一。利用微生物降解法降低或消除环境和农产品中3-PBA的污染，受到广泛关注。近年来国内外已分离得到的3-PBA降解菌主要来源于土壤和污泥，其种类以假单胞菌属为主，能降解3-PBA的真菌报道相对较少。Haldenetal.从土壤中分离到一株假单胞菌能够有效降解3-PBA；Chen等从土壤中分离到一株芽孢杆菌能够降解95.6%的50mg/L3-PBA。1989年，美国食品药物管理局（FDA）和美国饲料工业协会（AAFCO）公布的44种“可直接饲喂且通常认为是安全的微生物（GRAS）”作为微生态制剂的菌种中包括米曲霉；2013年，我国农业部公告（第2045号）公布的饲料添加剂的菌种中也包括了米曲霉。本发明提供了一株来源于食品厂酱油曲的具有3-PBA降解能力的米曲霉，同时其来源和菌种自身特性保证了其应用的安全性，可为环境或农畜产品等食品中3-PBA残留的降解或去除提供良好的菌种资源。

发明内容

本发明的目的是提供一株可有效降解3-苯氧基苯甲酸的菌株—米曲霉（Aspergillusoryzae）M-4。

本发明所提供的降解菌株为米曲霉（Aspergillusoryzae）M-4，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地点为北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏号为CGMCCNo.11645，保藏日期为2015年11月11日。

所述米曲霉降解3-PBA的步骤如下。

菌株M-4活化：挑取米曲霉M-4于PDA培养基上划线，30°C培养72h。

菌株M-4降解3-PBA：用无菌生理盐水将PDA培养基上的孢子洗脱并混匀制备孢子悬液。移取1mL孢子悬液接种于装有29mLPD培养基的250mL三角瓶中，加入3-PBA至一定浓度，以1mL生理盐水代替菌悬液为空白对照。30°C、180r/min振荡培养，定时取样，提取3-PBA，采用HPLC测定3-PBA降解率。

所述微生物降解3-PBA体系中3-PBA的提取方法为：采用全量（整瓶培养液）取样方式，加入等体积乙腈，于超声波清洗器（AS10200A）中40kHz、300W超声提取30min；取2.0mL超声提取液，用乙腈定容至10mL，混匀，取1.5mL混匀后的提取液于2mLEP管中，12000r/min离心10min，上清液用0.45μm有机相滤膜过滤，弃去初滤液，收集续滤液为样品溶液，HPLC检测续滤液中3-PBA残留浓度。

所述微生物降解体系中3-PBA的HPLC检测方法为：LC-10A2010CHT型液相色谱系统，Gemini100?C18柱（150mm×4.60mm，5.0μm）为色谱柱，磷酸水溶液（pH2.5）:乙腈（45:55v/v）为流动相，流速0.7mL/min，柱温25°C，进样量10μL，用紫外检测器在210nm处检测。