[发明专利]一种胶束电动毛细管电泳法测定γ‑氨基丁酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于色谱分析技术领域，尤其涉及一种胶束电动毛细管电泳法测定γ-氨基丁酸含量的方法。

背景技术

γ-氨基丁酸是中枢神经系统中很重要的抑制性神经递质，它是一种天然存在的非蛋白组成氨基酸，具有极其重要的生理功能，它能促进脑的活化性，健脑益智，抗癫痫，促进睡眠，美容润肤，延缓脑衰老机能，能补充人体抑制性神经递质，具有良好的降血压功效。促进肾机能改善和保护作用。抑制脂肪肝及肥胖症，活化肝功能。每日补充微量的γ-氨基丁酸有利于心脑血压的缓解，又能促进人体内氨基酸代谢的平衡，调节免疫功能。

γ-氨基丁酸属强神经抑制性氨基酸，具有镇静、催眠、抗惊厥、降血压的生理作用。它是抑制性神经递质(Inhibitory Neurotransmitter)，可以抑制动物的活动，减少能量的消耗。γ-氨基丁酸作用于动物细胞中的GABA受体，GABA受体是一个氯离子通道，GABA的抑制性或兴奋性是依赖于细胞膜内外的氯离子浓度的，GABA受体被激活后，导致氯离子通道开放，能增加细胞膜对氯离子通透性，使氯离子流入神经细胞内，引起细胞膜超极化，抑制神经细胞元激动，从而减少动物的运动量。它是通过减少动物的无意识运动，来减少能量消耗，从而达到促生长的目的。γ-氨基丁酸能促进动物胃液和生长激素的分泌，从而提高生长速度和采食量；能兴奋动物的采食中枢，从而增加采食量。

γ-氨基丁酸(GABA)是一种非蛋白质氨基酸,是哺乳动物中枢神经系统内重要的氨基酸类神经递质，具有促进脑细胞代谢、改善肝脏、肾脏功能、促进乙醇代谢、降血脂和防止肥胖等作用。γ-氨基丁酸的测定方法大多采用纸层析法、比色法、高效液相色谱法(HPLC)，但是否还有其它的定量检测方法适用于γ-氨基丁酸的定量检测还有待研究。

发明内容

本发明所要解决的一个技术问题是针对现有技术的现状提供一种利用胶束电动毛细管电泳法对γ-氨基丁酸的定量检测方法，该方法不仅能够使γ-氨基丁酸快速地与其他游离氨基酸得到快速简单高效的分离而且还可以同时对其他游离氨基酸进行定性定量。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：该胶束电动毛细管电泳法测定γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于：包括有如下步骤：

(1)石英毛细管柱的选择及预处理：

(2)电泳分析条件：

(3)绘制γ-氨基丁酸标准曲线：以γ-氨基丁酸标准样品的浓度和峰面积为坐标绘制γ-氨基丁酸标准曲线；

(4)样品衍生：

(5)γ-氨基丁酸的定量分析，其特征在于：所述步骤(2)中的电泳分析条件中：缓冲液pH＝8.0～10、60～80mmol/L硼砂-40～60mmol/L十二烷基硫酸钠-20～30mmol/Lβ-环糊精-质量浓度为1％～5％的异丙醇的混合物，缓冲液预冲洗10min，进样方式为0.3～0.6psi压力进样，进样时间4～7s，正向电压为10～25kv，毛细管柱温20～30℃，检测波长为214nm。

进一步地，所述步骤(1)中石英毛细管柱的选择及预处理：选用未涂层的50cm×75μm石英毛细管柱；所述石英毛细管柱先依次用甲醇冲洗10min，蒸馏水冲洗5min，1mol/LNaOH溶液冲洗30min，蒸馏水冲洗5min，最后再用运行缓冲液冲洗10-15min；每次进样前，用蒸馏水及运行缓冲液先后冲洗2min；运行缓冲液及样品溶液均用0.22μm微孔针头过滤器过滤；所述运行缓冲液为：pH＝9.5、40mmol/L硼砂-50mmol/L十二烷基硫酸钠-30mmol/Lβ-环糊精-体积浓度为3％的异丙醇的混合物。

进一步地，所述步骤(2)中缓冲液为60mmol/L硼砂-60mmol/L十二烷基硫酸钠-20mmol/Lβ-环糊精-质量浓度为3％的异丙醇的混合物。

进一步地，步骤(4)中样品衍生的衍生剂为20mmol/L芴甲氧羰酰氯，衍生方法为取待处理样品1ml加入等量的衍生剂，混匀，2min后加入1ml正戊烷，混匀静置，分层后取下清。

进一步地，步骤(5)中γ-氨基丁酸的定量分析为：取待处理样品，经过步骤(4)的衍化处理后，按照步骤(2)进样，获γ-氨基丁酸吸收峰面积，便可根据步骤(3)的标准曲线得到γ-氨基丁酸对应的质量浓度，便可对样品中的γ-氨基丁酸定量。

进一步地，所述步骤(3)中所述γ-氨基丁酸标准曲线是以γ-氨基丁酸标准样品的浓度和峰面积为坐标绘制γ-氨基丁酸标准曲线，为y＝0.000252x。