[发明专利]一种长双歧杆菌蛋白质、其制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种长双歧杆菌蛋白质、其制备方法 及应用。

背景技术

双歧杆菌作为肠道益生菌广为人知，近年来针对其肠道益生作用研究发现， 双歧杆菌的某些代谢产物能够抑制其他微生物在肠道内壁的定植，进而降低病原 微生物的侵害风险。该特征目前已经成为筛选双歧杆菌菌种、研发功能性益生菌 菌剂的重要依据。

现有技术研究发现，双歧杆菌对其他微生物定植于肠道内壁的抑制机制主要 是通过分泌有机酸降低肠道pH值，调节肠道微生态环境，同时分泌胞外酶从而 影响致病菌或细菌毒素的黏附位点及其特异性受体。此外，近年来有学者认为， 由双歧杆菌自身黏附于肠道所引发的占位效应和空间位阻效应可能是阻碍致病 菌黏附和入侵的一个重要因素。黏附蛋白作为双歧杆菌黏附并定植于胃肠道上皮 的重要因子，其物质基础、代谢特性在现有技术中尚无明确结论，

尽管现有技术中曾报道部分具有粘附性的双歧杆菌表达蛋白，但其是否就是 菌体定植于肠道内壁的功能性物质尚不明确；此外，在明确获得一种双歧杆菌粘 附蛋白的基础上，为实现进一步的应用，其表达量、纯化效率应当得到优化；再 次，针对双歧杆菌粘附蛋白，应当进一步研究其生物学特性，从而为该粘附蛋白 的其他用途奠定基础。

长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)是双歧杆菌属的一种，属革兰氏阳性、 无芽孢、不运动、厌氧性杆菌，广泛存在于人体尤其婴儿的肠道中，属于药品、 微生态菌剂制备领域的常规菌种之一。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种长双歧杆菌蛋白质、其制备 方法及应用，以解决现有技术中缺乏一种成分单一、结构明确的双歧杆菌粘附蛋 白的技术问题。

本发明要解决的另一技术问题是上述长双歧杆菌蛋白质制备方法不明确。

本发明要解决的再一技术问题是当采用重组表达方法制备上述长双歧杆菌 蛋白质时，其纯化效率较低。

本发明要解决的又一技术问题是上述长双歧杆菌蛋白质的应用范围存在局 限性。

本发明要解决的又一技术问题是微生物对抗生素的敏感性有待提升。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种长双歧杆菌蛋白质，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。

一种上述长双歧杆菌蛋白质的制备方法，包括以下步骤：

1)制备长双歧杆菌蛋白质的重组大肠杆菌表达菌株；

2)取步骤1)所述长双歧杆菌蛋白质的重组大肠杆菌表达菌株进行培养， 至培养液OD600nm为0.6～0.9时加入诱导剂IPTG至终浓度为0.8～1.2mM，而后 于35～39℃、震荡条件下诱导培养4～5h；

3)收集菌体、破碎、收集上清；

4)取步骤3)上清液，利用GST亲和层析纯化，收集洗脱液后超滤浓缩， 脱盐，干燥，即得到所述长双歧杆菌蛋白质。

作为优选，步骤3)所述的破碎是将菌体重悬于PBS缓冲液后，在冰浴条件 下超声破碎20～30次，每次破碎的持续时间为2～4s，每2次破碎之间的时间间 隔为4～6s。

作为优选，步骤4)具体包括以下操作：

a)取缓冲液A，以2.5～3.5mL/min的流速平衡谷胱甘肽琼脂糖树脂柱；

b)取步骤2)上清液，以1～2mL/min的流速上样；

c)取缓冲液B，以0.8～1.2mL/min的流速洗脱，收集洗脱峰处溶液即为洗脱 液；

d)取洗脱液超滤浓缩，而后过脱盐柱，再利用纯水以2.5～3.5mL/min的流 速洗脱，收集洗脱峰处溶液即为第二洗脱液，而后冷冻干燥，即得到所述长双歧 杆菌蛋白质；

其中所述缓冲液A是含有1.5～2.5mMEDTA的PBS缓冲液；

所述缓冲液B是含有1.5～2.5mMEDTA、15～25mM谷胱甘肽的PBS缓冲液； 进一步优选的，步骤a)中用于平衡谷胱甘肽琼脂糖树脂柱的缓冲液A用量为 25～35mL，更优的是30mL。

作为优选，步骤1)中所述的震荡是150～200r/min转速的摇床培养，更优的 是180r/min转速的摇床培养。

一种长双歧杆菌蛋白质用于提升微生物对抗生素敏感性的应用；进一步优选 的，是上述长双歧杆菌蛋白质作为抗生素抑菌增效剂的应用。