[发明专利]一种长双歧杆菌蛋白质、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种长双歧杆菌蛋白质，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。

2.一种权利要求1所述长双歧杆菌蛋白质的制备方法，其特征在于包括以 下步骤：

1)制备长双歧杆菌蛋白质的重组大肠杆菌表达菌株；

2)取步骤1)所述长双歧杆菌蛋白质的重组大肠杆菌表达菌株进行培养， 至培养液OD600nm为0.6～0.9时加入诱导剂IPTG至终浓度为0.8～1.2mM，而后 于35～39℃、震荡条件下诱导培养4～5h；

3)收集菌体、破碎、收集上清；

4)取步骤3)上清液，利用GST亲和层析纯化，收集洗脱液后超滤浓缩， 脱盐，干燥，即得到所述长双歧杆菌蛋白质。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤3)所述的破碎是将 菌体重悬于PBS缓冲液后，在冰浴条件下超声破碎20～30次，每次破碎的持续时 间为2～4s，每2次破碎之间的时间间隔为4～6s。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤4)具体包括以下操 作：

a)取缓冲液A，以2.5～3.5mL/min的流速平衡谷胱甘肽琼脂糖树脂柱；

b)取步骤2)上清液，以1～2mL/min的流速上样；

c)取缓冲液B，以0.8～1.2mL/min的流速洗脱，收集洗脱峰处溶液即为洗脱 液；

d)取洗脱液超滤浓缩，而后过脱盐柱，再利用纯水以2.5～3.5mL/min的流 速洗脱，收集洗脱峰处溶液即为第二洗脱液，而后冷冻干燥，即得到所述长双歧 杆菌蛋白质；

其中所述缓冲液A是含有1.5～2.5mMEDTA的PBS缓冲液；

所述缓冲液B是含有1.5～2.5mMEDTA、15～25mM谷胱甘肽的PBS缓冲液。

5.一种权利要求1所述长双歧杆菌蛋白质用于提升微生物对抗生素敏感性 的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述抗生素是β-内酰胺类抗生 素。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述抗生素是氨基糖苷类抗生 素。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述抗生素是酰胺醇类抗生素。

9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述微生物是单核增生李斯特 菌、大肠杆菌或鼠伤寒沙门氏菌。

10.根据权利要求5所述的应用，其特征于所述应用是利用含有浓度为 45～55μg/mL的、氨基酸序列为SEQIDNO:1的蛋白质溶液，以接触方式处理微生 物。