[发明专利]一种牛肌腱胶原蛋白的提取方法

权利要求书

1.一种牛肌腱胶原蛋白的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

将牛肌腱放入Tris-HCL缓冲液中，然后向所述缓冲液中加入0.05％～0.15％ 牛肌腱重量的适冷蛋白酶MCP-01并在38℃～42℃酶解后，得酶解液；

将酶解液离心后，取沉淀，用0.08％～0.12％乙酸溶解后过滤，得滤液；

将滤液盐析，得盐析液；

将盐析液离心，取沉淀，用水溶解后再加0.08％～0.12％乙酸继续溶解，得 胶原蛋白液；

将胶原蛋白液冷冻干燥后，即得牛肌腱胶原蛋白。

2.根据权利要求1所述的牛肌腱胶原蛋白的提取方法，其特征在于：牛肌 腱酶解前，用2倍牛肌腱体积的体积分数为0.3％的聚山梨酯80水溶液搅拌清洗 牛肌腱，用水冲洗牛肌腱至溶液清澈，然后用2倍牛肌腱体积的0.005mol/L氢 氧化钠溶液浸泡牛肌腱，再用水冲洗至牛肌腱表面为中性，最后将牛肌腱浸泡 在水中，剔除牛肌腱上粘附的膜后用水冲洗牛肌腱至无杂物。

3.根据权利要求1所述的牛肌腱胶原蛋白的提取方法，其特征在于：所述 缓冲液中Tris-HCL的浓度为0.01mol/L，缓冲液pH＝8.0，缓冲液体积为2倍牛 肌腱体积。

4.根据权利要求1所述的牛肌腱胶原蛋白的提取方法，其特征在于：将冻 干后的牛肌腱胶原蛋白进行分装、真空度检测和轧盖后，在98～100℃水浴保温 30分钟的条件下对胶原蛋白的非脂包膜病毒进行干热病毒灭活，然后进行钴-60 辐照，得医用胶原蛋白无菌制品。

5.根据权利要求1所述的牛肌腱胶原蛋白的提取方法，其特征在于，包括 如下步骤：

步骤1、剔除牛肌腱上的肉、骨、膜后，用2倍牛肌腱体积的体积分数为 0.3％的聚山梨酯80水溶液搅拌清洗牛肌腱，用水冲洗牛肌腱至溶液清澈，然后 用2倍牛肌腱体积的0.005mol/L氢氧化钠溶液浸泡牛肌腱，再用水冲洗至牛肌 腱表面为中性，最后将牛肌腱浸泡在水中，剔除牛肌腱上粘附的膜后用水冲洗 牛肌腱至无杂物；

步骤2、将冲洗至无杂物的牛肌腱冷冻、破碎，将破碎后的牛肌腱放入2倍 牛肌腱体积的浓度为0.01mol/L、pH＝8.0的Tris-HCL缓冲液中，然后向所述缓 冲液中加入0.1％牛肌腱重量的适冷蛋白酶MCP-01并在40℃酶解后，得酶解液； 将酶解液离心后，取沉淀，用0.1％乙酸溶解后过滤，得滤液；将滤液盐析，得 盐析液；将盐析液离心，将沉淀加水溶解后再次离心，然后加水溶解沉淀，再 加0.1％乙酸继续溶解，冻干即得牛肌腱胶原蛋白；

步骤3、将冻干后的牛肌腱胶原蛋白进行分装、真空度检测和轧盖后，在 98～100℃水浴保温30分钟的条件下对胶原蛋白的非脂包膜病毒进行干热病毒灭 活，然后进行钴-60辐照，得医用胶原蛋白无菌制品。