[发明专利]一种麝源性成分的PCR检测引物及检测方法

说明书

本发明公开了一种麝源性成分的PCR检测引物及检测方法。所述引物对的序列为：F‑primer：TGGAGCTTTAACTAACTAGCCT；R‑primer：TGGATCAATGAGCGATATTGTG。本发明根据GenBank中公布的麝线粒体DNA（mtDNA）序列，在其高度保守区域设计了一对特异性引物，实验结果表明该引物特异性较好，对麝样品均能进行特异性扩增，对其他动物样品（包括鹿科动物）均未见特异性扩增，且灵敏度较高，能检测到的最低质粒拷贝数量级为10²拷贝/μL。本方法可应用于市场上常见麝源性成分的快速鉴定。

技术领域

本发明属于分子检测领域，具体涉及一种麝源性成分的PCR检测引物及检测方法。

背景技术

根据中国动物分类代码(GB/T 15628.1-2009)，麝属于哺乳纲偶蹄目麝科麝属，具体分为：林麝，马麝、黑麝、喜马拉雅麝和原麝，有资料将其归入鹿科中的麝亚科。麝是亚洲东部的特产物种。从生活于寒冷地带的雄麝生殖腺提取的麝香，内服能刺激中枢神经、破血、化瘀，外用能镇痛、消肿，是极为名贵的中药和香料，具有很高的经济价值。20世纪中叶以来，因麝香需求量的急剧增加，麝香价格的快速上升，导致麝科动物被过渡捕杀、盗猎，野生麝资源遭到严重破坏。根据《中华人民共和国野生动物保护法》和国家林业局令第七号，我国于2003年将麝科所有物种纳入国家一类重点保护野生动物，世界自然保护联盟组织也将麝列入渐危物种。为了加强对麝类的保护，鉴别麝香的真伪，限制其非法贸易，建立一种更加合适的对来源于麝的可疑样品的DNA检测方法是必需的。目前对麝及其产品的DNA研究主要集中在DNA的提取方面，对麝及其产品市场所需的总类成分DNA检测与鉴定技术(非鉴定到种)的研究还较为少见，对麝香的真伪鉴定也只局限于简单的显微镜观察比对法，尚无用于鉴定麝源性成分的分子生物学检测方法。

发明内容

针对现有技术中所存在的不足，本发明的目的在于提供一种麝源性成分的PCR检测引物对、试剂盒及检测方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种用于检测麝源性成分的PCR引物对，其特征在于，所述引物组是根据麝线粒体DNA序列设计的。

作为优选的，所述引物对的序列如下所示：

F-primer：5’-TGGAGCTTTAACTAACTAGCCT-3’(SEQ ID NO.1)；

R-primer：5’-TGGATCAATGAGCGATATTGTG-3’(SEQ ID NO.2)。

一种麝源性成分的PCR检测方法，包括如下步骤：

(1)提取样品DNA作为扩增模板，麝样品DNA为阳性对照；

(2)以如下所示的引物对进行PCR扩增：

F-primer：5’-TGGAGCTTTAACTAACTAGCCT-3’(SEQ ID NO.1)，

R-primer：5’-TGGATCAATGAGCGATATTGTG-3’(SEQ ID NO.2)；

(3)对PCR产品进行凝胶电泳，根据电泳结果判断样品中是否含有麝源性成分。

50μL PCR反应体系的组成为：2×Taq PCR Master mix 25μL，10μmol/L上下游引物各2.0μL，DNA模版4.0μL，补水至50μL。

本发明的有益效果是：