[发明专利]一种罗博卢酮的生物合成基因簇及其应用

权利要求书

1.一种托酚酮类天然产物罗博卢酮的生物合成基因簇，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第6308～28758位的碱基序列所示。

2.链霉菌Streptomyces sp.CGMCC No.11535。

3.如权利要求1所述的一种托酚酮类天然产物罗博卢酮的生物合成基因簇，其特征在于该生物合成基因簇是从包含有整个罗博卢酮生物合成基因簇的科斯质粒p9B10中测序获得的，该罗博卢酮的生物合成基因簇的核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第6308～28758位的碱基序列所示，包含24个基因，具体为：

(1)负责罗博卢酮的酚酮七元环骨架合成的基因，即rubA、rubB、rubC、rubE1、rubE2、rubE3、rubE4、rubE5、rubE6、rubE7、rubE8、rubE9共12个基因：

rubA位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第16318-17253个碱基处，长度为936个碱基对，编码F-420依赖的氧化还原酶，311个氨基酸；

rubB位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第17831-19387个碱基处，长度为1557个碱基对，编码氧化酶，518个氨基酸；

rubC位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第19384-20553个碱基处，长度为1170个碱基对，编码水解酶，389个氨基酸；

rubE1位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第20926-21885个碱基处，长度为960个碱基对，编码III型酮基合成酶，319个氨基酸；

rubE2位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第22167-22442个碱基处，长度为276个碱基对，编码II型PKS酰基载体蛋白，91个氨基酸；

rubE3位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第22597-23517个碱基处，长度为921个碱基对，编码酰基转移酶，306个氨基酸；

rubE4位于基因簇核苷酸序列第23587-23841个碱基处，长度为255个碱基对，编码II型PKS酰基载体蛋白，84个氨基酸；

rubE5位于基因簇核苷酸序列第24281-24775个碱基处，长度为495个碱基对，编码环化/脱氢酶，164个氨基酸；

rubE6位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第24775-25530个碱基处，长度为756个碱基对，编码环化酶，251个氨基酸；

rubE7位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第25527-26147个碱基处，长度为621个碱基对，编码NADH依赖的脱氢酶，206个氨基酸；

rubE8位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第26297-27526个碱基处，长度为1230个碱基对，编码II型PKS酮基合成酶，409个氨基酸；

rubE9位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第27556-28758个碱基处，长度为1203个碱基对，编码II型PKS链延伸因子模块，400个氨基酸；

(2)负责罗博卢酮的糖基合成的基因，即rubS1、rubS2、rubS3、rubS4、rubS5、rubS6、rubS7共7个基因：

rubS1位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第6308-7786个碱基处，长度为1478个碱基对，编码FAD-依赖的氧化还原酶，492个氨基酸；

rubS2位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第8303-8917个碱基处，长度为615个碱基对，编码dTDP-葡糖3,5-异构酶，204个氨基酸；

rubS3位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第9053-9985个碱基处，长度为933个碱基对，dTDP-葡糖4-酮基还原酶，310个氨基酸；

rubS4位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第9982-11013个碱基处，长度为1032个碱基对，编码dTDP-葡糖4,6脱水酶，343个氨基酸；

rubS5位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第11030-11899个碱基处，长度为870个碱基对，葡糖-1磷酸-胸苷转移酶，289个氨基酸；

rubS6位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第11921-12757个碱基处，长度为837个碱基对，编码NAD依赖的异构酶/脱水酶，278个氨基酸；

rubS7位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第12868-14022个碱基处，长度为1155个碱基对，编码糖苷转移酶，384个氨基酸；

(3)负责罗博卢酮调控子蛋白的基因，即rubR1、rubR2共2个基因：

rubR1位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第14232-15269个碱基处，长度为1038个碱基对，编码SARP家族转录调控子，345个氨基酸；

rubR2位于基因簇核苷酸序列第15329-15676个碱基处，长度为348个碱基对，编码转录调控蛋白，115个氨基酸；

(4)其它功能尚未明确的蛋白，rubN共1个基因：

rubN位于基因簇核苷酸序列SEQ ID NO.1第7783-8190个碱基处，长度为408个碱基对，编码未知功能蛋白，135个氨基酸。