[发明专利]乳腺癌早期诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种乳腺癌早期诊断试剂盒。

背景技术

乳腺癌是发生在乳腺上皮组织的恶性肿瘤，是女性最常见的恶性肿瘤之一，发病率占全身各种恶性肿瘤的7％～10％，死亡率已经排在女性癌症死亡率之首。乳腺癌在40-60岁间、绝经期前后的妇女发病率较高，发病率正逐年上升，并且显示出年轻化的趋势。目前乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。乳腺并不是维持人体生命活动的重要器官，原位乳腺癌并不会致命，但是由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间粘着性发生变化，容易脱落。癌细胞一旦脱落，游离的癌细胞便可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命。手术、放疗、化疗和激素疗法对乳腺癌有很高的治疗性，这种病在早期阶段被检测到时很多时候是可治愈的。早期乳腺癌的治愈率高，晚期的治愈率低，据国内资料报道，乳腺癌I期的5年生存率在90％～95％以上，II期是70％～80％，III期是50％～60％，而IV期则是10％左右，其治愈率与临床分期存在显著相关性。目前对乳腺癌的发病机制尚未完全清楚，因此早期诊断、早期治疗对于乳腺癌的防治具有重要意义，是提高疗效的关键途径。然而，由于乳腺癌早期诊断检测技术的限制，多数乳腺癌患者确诊时已处于晚期，错过了最佳的治疗时机。

循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)是因自发或诊疗操作从实体肿瘤病灶(原发灶、转移灶)脱落，进入外周血中的各类肿瘤细胞的统称，目前认为CTCs可能是肿瘤转移的早期阶段。肿瘤细胞侵入到原发肿瘤细胞的周围组织中，进入血液和淋巴管系统，形成CTCs，并转运到远端组织，再渗出，适应新的微环境，最终“播种”、“增殖”、“定植”、形成转移灶。因此早期发现血液中的CTC，对于癌症的早期诊断、疗效评价、个体化治疗和预后判断都有着重要的指导作用。

目前对于乳腺癌的早期诊断主要依赖于临床医学影像(B超、CT、核磁共振成像等)及和其它生化指标的检测，这些检测方法都属于肿瘤形成后诊断。临床研究早已证实，肿瘤团块一旦形成，癌细胞通过不同途径迁移到其它部位克隆生长。虽然也有针对乳腺癌相关肿瘤基因的mRNA早期筛查技术，如RT-PCR、real-time PCR和荧光原位杂交等，但目前的检测主要基于PCR反应原理，具有易污染、假阳性率高等缺陷，而传统的RNA荧光原位杂交本身具有 信号灵敏度低的缺点。此外，缺乏特异性的早期诊断分子标志物也是限制乳腺癌早期诊断的重要因素。因此，急需一种针对乳腺癌早期诊断的分子标志物，以及特异性强、灵敏度高的检测方法，能在基因的一级转录功能产物(mRNA水平)上做更精确的早期筛查和诊断。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性强、灵敏度高的乳腺癌早期诊断试剂盒。

实现上述目的的技术方案如下。

一种乳腺癌早期诊断试剂盒，包括针对检测目标基因mRNA的捕获探针、扩增探针和标记探针；所述目标基因包括有乳腺癌筛查基因、和乳腺癌CTC标志基因，所述乳腺癌筛查基因选自MUC1、HER2、hMAM、CEA、COX2中的至少两种；所述乳腺癌CTC标志基因选自CK19、SERPINE1、EpCAM、hTERT中至少两种；所述排除基因选自CD45、CD34、CD105、CD144、CD146、VWF中至少两种；其中，所述捕获探针连接目标基因mRNA与扩增探针，每条捕获探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：与待检测的目标基因mRNA结合的特异性序列P1、间隔臂序列、P2序列，所述P2序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与P1、P4和目标基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列，针对同一类别目标基因的捕获探针的P2序列相同；每条扩增探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与相应捕获探针的P2序列互补配对的P3序列、间隔臂序列、P4序列；所述P4序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配、与P1、P2、P3和总mRNA之间均不存在特异性结合的序列；每条标记探针具有与相应扩增探针P4序列互补配对的P5序列，且末端修饰有荧光基团，不同细胞种类目标基因的荧光基团互不相同。

在其中一个实施例中，所述目标基因还包括排除基因mRNA，所述排除基因选自CD45、CD34、CD105、CD144、CD146、VWF中至少两种