[发明专利]乳腺癌早期诊断试剂盒

权利要求书

1.一种乳腺癌早期诊断试剂盒，其特征在于，包括针对检测目标基因mRNA的捕获探针、扩增探针和标记探针；所述目标基因包括乳腺癌筛查基因和乳腺癌CTC标志基因，所述乳腺癌筛查基因选自MUC1、HER2、hMAM、CEA、COX2中的至少两种；所述乳腺癌CTC标志基因选自CK19、SERPINE1、EpCAM、hTERT中至少两种；其中，

所述捕获探针连接目标基因mRNA与扩增探针，每条捕获探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：与待检测的目标基因mRNA结合的特异性序列P1、间隔臂序列、P2序列，所述P2序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与P1、P4和目标基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列，针对同一类别目标基因的捕获探针的P2序列相同；

每条扩增探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与相应捕获探针的P2序列互补配对的P3序列、间隔臂序列、P4序列；所述P4序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配、与P1、P2、P3和总mRNA之间均不存在特异性结合的序列；

每条标记探针具有与相应扩增探针P4序列互补配对的P5序列，且末端修饰有荧光基团，不同细胞种类目标基因的荧光基团互不相同。

2.根据权利要求1所述的乳腺癌早期诊断试剂盒，其特征在于，所述目标基因还包括排除基因mRNA，所述排除基因选自CD45、CD34、CD105、CD144、CD146、VWF中至少两种。

3.根据权利要求1所述的乳腺癌早期诊断试剂盒，其特征在于，所述乳腺癌筛查基因的捕获探针中：针对MUC1基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.10中的2条或2条以上，针对HER2基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.11～SEQ ID NO.20中的2条或2条以上，针对hMAM基因特异性序列P1的选自SEQ ID NO.21～SEQ ID NO.30中的2条或2条以上，针对CEA基因特异性序列P1的选自SEQ ID NO.31～SEQ ID NO.40中的2条或2条以上，针对COX2基因特异性序列P1的选自SEQ ID NO.41～SEQ ID NO.50中的2条或2条以上；针对乳腺癌筛查基因的捕获探针的特异性序列P2为SEQ ID NO.151；所述乳腺癌筛查基因mRNA扩增探针中，P3序列为SEQ ID NO.154，P4序列为SEQ ID NO.157。

4.根据权利要求1所述的乳腺癌早期诊断试剂盒，其特征在于，所述乳腺癌CTC标志基因的捕获探针中：针对CK19基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.51～SEQ ID NO.60中的2条或2条以上，针对SERPINE1基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.61～SEQ ID NO.70中的2条或2条以上，针对EpCAM基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO71～SEQ ID NO.80中的2条或2条以上，针对hTERT基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.81～SEQ ID NO.90中的2条或2条以上；针对乳腺癌CTC标志基因的捕获探针的P2序列为SEQ ID NO.152；所述乳腺癌CTC标志基因mRNA扩增探针中，P3序列为SEQ ID NO.155，P4序列为SEQ ID NO.158。

5.根据权利要求2所述的乳腺癌早期诊断试剂盒，其特征在于，所述排除基因的捕获探针中：针对CD45基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.91～SEQ ID NO.100中的2条或2条以上，针对CD34基因特异性序列P1选自SEQ ID NO.101～SEQ ID NO.110中的2条或2条以上，针对CD105基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.111～SEQ ID NO.120中的2条或2条以上，针对CD144基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.121～SEQ ID NO.130中的2条或2条以上，针对CD146基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.131～SEQ ID NO.140中的2条或2条以上，针对VWF基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.141～SEQ ID NO.150中的2条或2条以上；针对排除基因的捕获探针的P2序列为SEQ ID NO.153；所述排除基因mRNA扩增探针中，P3序列为SEQ ID NO.156，P4序列为SEQ ID NO.159。