[发明专利]一种快速检测玉米赤霉烯酮的方法

说明书

本发明涉及一种快速检测玉米赤霉烯酮的方法，该方法包括如下步骤：（A）使玉米赤霉烯酮核酸适体（Apt）和可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单链信号探针ssDNA杂交，形成杂交链；（B）使该杂交链与待测样品接触，当待测样品中有玉米赤霉烯酮存在时，杂交链与玉米赤霉烯酮反应释放出单链信号探针ssDNA；（C）利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用核酸外切酶选择性地催化双链DNA水解成单核苷酸，体系中单链信号探针ssDNA不水解而保留下来；（D）在铜离子还原检测体系中检测体系荧光强度，从而测定待测样品中的真菌毒素玉米赤霉烯酮的含量。所述方法可以消除干扰，提高了玉米赤霉烯酮的检测灵敏度和精度。

技术领域

本发明属纳米生物传感以及生物检测技术领域，涉及玉米赤霉烯酮的检测方法及检测试剂盒。

背景技术

玉米赤霉烯酮主要由禾谷镰刀菌产生，粉红镰刀菌、窜珠镰刀菌、三线镰刀菌等多种镰刀菌也能产生这种毒素。李季伦1980年研究发现，许多农作物如小麦、大豆等植物中也存在玉米赤霉烯酮。玉米赤霉烯酮主要污染玉米、小麦、大米、大麦、小米和燕麦等谷物。其中玉米的玉米赤霉烯酮阳性检出率为45%，最高含毒量可达到2909mg/kg；小麦的检出率为20%，含毒量为0.364～11.05mg/kg。玉米赤霉烯酮的耐热性较强，110℃下处理1h才被完全破坏。玉米赤霉烯酮具有雌激素样作用，能造成动物急慢性中毒，引起动物繁殖机能异常甚至死亡，可给畜牧场造成巨大经济损失。因此对玉米赤霉烯酮检测显得十分必要。

现有分析方法有色谱、免疫法，前者灵敏度不够，后者存在试剂贵、易失活等缺点。中国专利CN102443585A公开了一种玉米赤霉烯酮核酸适体及其应用，其可用于玉米赤霉烯酮的检测，但存在生物标记的DNA价格昂贵的问题。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种快速检测玉米赤霉烯酮的方法。

本发明采用的技术方案：一种快速检测玉米赤霉烯酮的方法，该方法包括如下步骤：

（A）使玉米赤霉烯酮核酸适体（Apt）和可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单链信号探针ssDNA杂交，形成杂交链；

（B）使该杂交链与待测样品作用，当待测样品中有玉米赤霉烯酮存在时，杂交链选择性地与玉米赤霉烯酮反应释放出单链信号探针ssDNA；

（C）为了消除杂交链的干扰，利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用外切酶选择性地催化双链DNA水解成单核苷酸，体系中单链信号探针ssDNA未水解而保留下来；

（D）利用铜离子在玉米赤霉烯酮核酸适体-玉米赤霉烯酮结合体中不能被还原生成荧光发射峰在620 nm左右的铜纳米粒子，铜离子只在单链信号探针ssDNA存在情况下被还原生成ssDNA修饰的在620 nm左右（发射峰位置）有强的荧光发射的铜纳米粒子的原理，在铜离子还原检测体系中检测体系的荧光强度，从而测定待测样品中的真菌毒素玉米赤霉烯酮的含量。

所述铜离子还原检测体系包括先后添加的铜离子和使铜离子还原成铜纳米粒子的还原剂维生素C。步骤（D）的检测例如包括依次先后向体系中加入铜离子溶液和维生素C溶液，反应后生成荧光发射峰在620 nm左右的铜纳米粒子。

所述玉米赤霉烯酮核酸适体为5’-GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTGGGGATGGGAGGTTGTTTACGCAGGAGATGTTAATCGTGTGAAGTGC-3’。

所述的单链信号探针ssDNA为5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGCACTTCACACGATT-3’。