[发明专利]一种快速检测玉米赤霉烯酮的方法

权利要求书

1.一种快速检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征是，该方法包括如下步骤：

（A）玉米赤霉烯酮核酸适体Apt与单链信号探针ssDNA杂交，形成杂交链；

（B）使该杂交链与待测样品作用，当待测样品中有玉米赤霉烯酮存在时，杂交链选择性地与玉米赤霉烯酮反应释放出单链信号探针ssDNA；

（C）为了消除杂交链的干扰，利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用核酸外切酶ExoIII选择性地催化双链DNA水解成单核苷酸，体系中单链信号探针ssDNA不水解而保留下来；

（D）利用铜离子不能在玉米赤霉烯酮核酸适体-玉米赤霉烯酮结合体中被还原生成荧光发射峰在620 nm左右的铜纳米粒子，铜离子只在单链信号探针ssDNA中还原并生成被ssDNA修饰的在620 nm左右有荧光发射的铜纳米粒子的原理，在铜离子还原检测体系中检测体系的荧光强度，从而测定待测样品中的真菌毒素玉米赤霉烯酮的含量；所述铜离子还原检测体系为在反应液中加入硝酸铜的PBS缓冲液、以及维生素C溶液构成的还原反应体系；

所述玉米赤霉烯酮核酸适体为5’-GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTGGGGATGG

GAGGTTGTTTACGCAGGAGATGTTAATCGTGTGAAGTGC-3’；

所述的单链信号探针ssDNA为5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT

TTTTTTGCACTTCACACGATT-3’。

2.一种用于快速检测玉米烯酮的试剂盒，其特征是，其包括：玉米赤霉烯酮核酸适体、单链信号探针ssDNA、DNA扩增体系、核酸外切酶ExoIII、铜离子还原检测体系；所述铜离子还原检测体系为在反应液中加入硝酸铜的PBS缓冲液、以及维生素C溶液构成的还原反应体系；

所述玉米赤霉烯酮核酸适体为5’-GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTGGGGATGG

GAGGTTGTTTACGCAGGAGATGTTAATCGTGTGAAGTGC-3’；

所述的单链信号探针ssDNA为5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT

TTTTTTGCACTTCACACGATT-3’；

所述DNA扩增体系包括缓冲溶液、三磷酸脱氧单核苷酸混合溶液dNTP和Phi29DNA聚合酶；所述的缓冲溶液由Tris-HCl、MgCl₂、 (NH₄)₂SO₄组成。