[发明专利]一种3-氨基哌啶异构体的HPLC分析方法

说明书

本发明公开了一种3‑氨基哌啶异构体的HPLC分析方法。该方法以(R)‑α‑甲基‑2‑萘乙酰氯为衍生化试剂与3‑氨基哌啶进行快速双衍生化反应，通过反相高效液相色谱与紫外检测器联用对3‑氨基哌啶异构体进行测定，属于药物分析技术领域。该方法衍生反应条件温和、快速，检测灵敏度高、重复性好、易于标准化操作，可用于有效地检测3‑氨基哌啶异构体，适用于工业化生产3‑氨基哌啶过程中对3‑氨基哌啶异构体的质量控制。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种3-氨基哌啶异构体的HPLC分析方法。

背景技术

(R)-3-氨基哌啶是Ⅱ型糖尿病新药利拉利汀、阿格列汀的重要中间体。利拉利汀、阿格列汀分子结构中只有一个手性中心，由中间体(R)-3-氨基哌啶引入，因此(R)-3-氨基哌啶的光学纯度直接决定了利拉利汀、阿格列汀的光学纯度和药效。

相比示差折光检测器，紫外检测器具有更高的灵敏度和稳定性。但由于3-氨基哌啶及其手性异构体紫外吸收很弱，使用常规的紫外检测存在末端吸收干扰等问题，通常采用衍生化方法使之紫外吸收增强从而提高检测灵敏度，再通过手性色谱进行分析检测。

Meek等采用Crownpak^TM CR+(150×4.6mm)手性柱，示差折光检测器直接对3-氨基哌啶进行检测，Sakarai等采用二对甲基苯甲酰L-酒石酸为衍生化试剂对3-氨基哌啶进行衍生化，采用GL Science Inertsil ODS-2(150×4.6mm)手性柱，254nm下对衍生物进行分析。Watanabe等人采用氯甲酸丙酯为衍生化试剂对3-氨基哌啶进行衍生，采用CHIRALCELAS-RH (150×4.6mm) 手性柱在254nm下对衍生物进行分析。孙凤霞等(CN104007202ACN104034814A)采用苯甲酰氯为衍生化试剂对3-氨基哌啶分别进行单衍生化和双衍生化，使用CHIRAL-AGP(150×4.6mm)手性柱，在254nm下对衍生物进行分析。示差折光检测器灵敏度低，进样量大，误差较大。而以紫外进行的检测，既衍生化又采用价格昂贵的手性柱。

3-氨基哌啶分子结构中有两个氮原子，由于氮原子的孤对电子能量较低，所以3-氨基哌啶在紫外区几乎无吸收，建立快捷的、准确可靠的光学纯度分析方法难度非常的大。通过与带紫外吸收的手性试剂进行快速双衍生化，得到既有紫外吸收又形成三个手性基团的衍生物，能够直接在反相高效液相与紫外联用上进行异构体的分析。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种3-氨基哌啶异构体的HPLC分析方法，可以快捷准确的实现定性、定量和对映体过量率分析。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种3-氨基哌啶异构体的HPLC分析方法，具体包含如下步骤：

步骤一、衍生化

将3-氨基哌啶溶于有机溶剂中，在一定的温度条件下，以(R)-α-甲基-2-萘乙酰氯为衍生化试剂，控制3-氨基哌啶和(R)-α-甲基-2-萘乙酰氯的摩尔比，进行双衍生化反应，得到衍生化后的3-氨基哌啶，反应式见式I；

式I

步骤二、分离检测

采用反相高效液相色谱-紫外检测器对衍生化后的3-氨基哌啶进行定性、定量和对映体过量率测定。

所述的有机溶剂选自甲苯、二甲苯、石油醚、四氢呋喃、庚烷和己烷中的一种或两种以上的组合。