[发明专利]ROS1融合基因ARMS荧光定量PCR分型检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种ROS1融合基因ARMS荧光定量PCR分型检测试剂盒，包括：用于检测ROS1融合基因变体的正向引物、共用反向引物和荧光探针；所述正向引物为SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.10所示的十种单链DNA中的至少一种；所述共用反向引物为SEQ ID NO.11至SEQ ID NO.13所示的三种单链DNA中的至少一种；所述荧光探针为SEQ ID NO.14至SEQ ID NO.16所示的三种单链DNA中的至少一种。本发明还公开了ROS1融合基因变体的检测方法。本发明针对ROS1融合基因变体设计了特异性引物和荧光探针，提高了对ROS1融合基因变体检测的敏感性和特异性，假阳性低。

技术领域

本发明涉及一种ROS1融合基因ARMS荧光定量PCR分型检测试剂盒，属于分子生物学检测技术领域。

背景技术

肺癌是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。肺癌分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)，其中NSCLC包括鳞癌、腺癌、腺鳞癌、大细胞癌、类癌等，NSCLC占所有肺癌病例的80-90％，每年新发肺癌病例约为150万，严重威胁人类健康。NSCLC的治疗包括手术、化疗、放疗、分子靶向治疗及生物免疫治疗等多种方法。手术治疗是NSCLC最佳治疗方法，但当NSCLC发现时，仅20-30％的病例有手术指征，且术后复发和转移率仍高达50％以上。分子靶向治疗以其符合生理、低毒和理论上高效的特点，越来越成为非小细胞肺癌治疗的热点。靶向治疗为肺癌的治疗增添了一个新的领域，也为肺癌的个体化治疗带来了新的希望。

未来肺腺癌的个体化治疗的趋势是先确定基因突变相关的分子分型。肺腺癌常见的基因变异有表皮生长因子受体(EGFR)、Kirsten鼠肉瘤病毒基因(K-ras)、原癌基因人类表皮生长因子受体2(HER2)、鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)基因突变，棘皮动物微管相关类蛋白4(EML4)与间变性淋巴瘤激酶(ALK)融合基因EML4-ALK、驱动蛋白家5B基因(KIF5B)与酪氨酸激酶受体(RET)融合基因KIF5B-RET，EGFR突变与EML4-ALK融合并存以及新发现的活性氧基团基因1(ROS1)的重排。不同的基因变异型患者存在不同的治疗靶点，临床治疗及疗效亦存在明显的个体差异性。就目前的研究而言，20％～30％的NSCLC患者存在ROSl的高表达，作为最新发现的肺癌驱动基因，对临床实践具有非常重要的指导意义。ROSl融合基因的发现及其抑制剂临床活性的证实，进一步推动了晚期NSCLC个体化治疗的发展。目前对于女性不吸烟的亚裔NSCLC患者而言，通过分子标志物检测，94％的患者可获知其肿瘤驱动基因的表达。而在不远的将来，随着这些不同的分子标志物检测手段的成熟，我们必将迎来NSCLC个体化治疗的全新突破。