[发明专利]快速检测低丰度蛋白质的无封闭的蛋白质印迹法有效
| 申请号： | 201610037897.4 | 申请日： | 2016-01-20 |
| 公开（公告）号： | CN105675880B | 公开（公告）日： | 2018-11-27 |
| 发明（设计）人： | 邓斌;李玲;胡博 | 申请（专利权）人： | 华南师范大学 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京市立方律师事务所 11330 | 代理人： | 刘延喜;王增鑫 |
| 地址： | 510631 广东省广州市天河*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 快速 检测 低丰度 蛋白质 封闭 印迹 | ||
1.一种快速检测低丰度蛋白质的无封闭的蛋白质印迹法，其特征在于，其包括以下步骤：
(1)使用凝胶将从样品中提取的总蛋白质进行梯度分离；
(2)将已梯度分离的总蛋白质从凝胶印迹到PVDF膜；
(3)将印迹有所述总蛋白质的PVDF膜浸泡在100％甲醇中，浸泡时间为8～15s；
(4)干燥经100％甲醇处理的所述PVDF膜；
(5)对干燥的PVDF膜中的目标蛋白质进行显色检测。
2.如权利要求1所述的快速检测低丰度蛋白质的无封闭的蛋白质印迹法，其特征在于：所述经100％甲醇处理的PVDF膜的干燥方法为自然晾干。
3.如权利要求2所述的快速检测低丰度蛋白质的无封闭的蛋白质印迹法，其特征在于：所述晾干时间为10～15mi n。
4.如权利要求2所述的快速检测低丰度蛋白质的无封闭的蛋白质印迹法，其特征在于：所述PVDF膜放置在滤纸上进行晾干。
5.如权利要求1所述的快速检测低丰度蛋白质的无封闭的蛋白质印迹法，其特征在于，所述对目标蛋白质的显色检测步骤包括：
(5.1)进行目标蛋白质与该目标蛋白质的抗体之间的免疫性结合；
(5.2)进行所述目标蛋白质的抗体与显色标记物之间的免疫性结合；
(5.3)进行显色反应并且展示显色结果。
6.如权利要求5所述的快速检测低丰度蛋白质的无封闭的蛋白质印迹法，其特征在于，所述步骤(5.1)还包括将未结合的所述目标蛋白质的抗体进行漂洗的步骤：将结合有所述目标蛋白质的抗体的PVDF膜置于含有TBST的洗涤液中漂洗两次，每次8～15s。
7.如权利要求5所述的快速检测低丰度蛋白质的无封闭的蛋白质印迹法，其特征在于，所述步骤(5.2)还包括将未结合的所述显色标记物进行漂洗的步骤：将结合有所述显色标记物的PVDF膜置于含有TBST的洗涤液中漂洗两次，每次8～15s。
8.如权利要求1所述的快速检测低丰度蛋白质的无封闭的蛋白质印迹法，其特征在于：所述样品来源于植物或动物。
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