[发明专利]黄花列当指纹图谱建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体涉及中药材指纹图谱建立方法和药材质量评价方法。

背景技术

黄花列当，又名独根草。为列当科列当属植物黄花列当(Orobanche pycnostachya Hance)的干燥全草。分布于东北、华北、山西、陕西等地。具有补肾助阳，强筋骨的功效，用于治疗肾虚腰膝冷痛、阳痿遗精、神经官能症，小儿腹泻等症。民间也作为名贵药材“沙漠人参”肉从蓉的代用品。列当科植物普遍含有苯乙醇苷，是苯乙醇苷类成分的重要资源植物。现代药理研究表明该类化合物具有良好医疗价值，如：抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、清除自由基、免疫调节、增强记忆、保肝、强心等作用。

中药指纹图谱是目前国内外公认的能较全面的反映药材信息，鉴别药材品种和评价中药质量的有效手段之一，它主要是通过采用现代色谱及波普技术得到中药组分群体共有特征的图谱或图像。

目前关于对列当药材的质量控制未见较全面的报道，《中国药典》中也未对其质量标准进行收载。因此，建立能较全面反映列当药材质量信息的方法，对于指导列当药材入药，加大列当药材开发利用限度是非常有必要和有意义。

发明内容

本发明提出一种黄花列当指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：

1)供试品溶液的制备：取黄花列当药材粉末，加70％甲醇，称定重量，浸泡，超声处理，用溶剂补足减失的重量，滤过，取续滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，备用；

2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，获得指纹图谱，采用的色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：乙腈(A)-1‰磷酸水溶液(B)，梯度洗脱89％B(0min)～85％B(13min)～81％B(22min) ～78％B(33min)～76％B(50)min；流速：1ml/min；检测波长230～400nm；柱温20～30℃；进样量5～15μl。

作为优选，色谱柱采用规格为250mm×4.6mm,5μm的岛津Inertsil ODS-SP HPLC色谱柱或者YMC-Pack ODS-A色谱柱。

进一步的优选是，步骤1)中，取黄花列当药材粉末0.15g，加70％甲醇25ml，称定重量，浸泡1h，超声处理40min，用溶剂补足减失的重量，滤过，取续滤液以0.45μm微孔滤膜滤过。

更优选地，流速为1ml/min；检测波长295nm；柱温25℃；进样量10μl。

本发明还提供一种利用指纹图谱评价黄花列当药材质量的方法，包括以下步骤：步骤一：建立标准指纹图谱，包括：a)分别从10批以上不同产地的样品制备供试品溶液：取黄花列当药材粉末，加70％甲醇，称定重量，浸泡，超声处理，用溶剂补足减失的重量，滤过，取续滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，备用；b) 对照品溶液的制备：称取1)α-L-鼠李糖(1→3)[β-D-葡萄糖(1→6)]-O-(4-O-咖啡酰)-D-葡萄糖咖啡酰三糖苷、2)芥子酸-4-O-β-D葡萄糖苷、3)7-羟基毛蕊花糖苷、4)7-甲氧基毛蕊花糖苷、5)毛蕊花糖苷、6)圆齿列当苷、7)3’-甲氧基毛蕊花糖苷)、8)2’-乙酰毛蕊花糖苷、9)异圆齿列当苷共9种对照品，用甲醇溶解定容，制成一定浓度的混合溶液，微孔滤膜0.45μm滤过，备用；c)先后将各供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪中，分别获得指纹图谱，色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：乙腈(A)-1‰磷酸水溶液(B)，梯度洗脱89％B(0min)～85％B(13min)～81％B(22min)～78％B (33min)～76％B(50)min；流速：1ml/min；检测波长230～400nm；柱温20～ 30℃；进样量5～15μl；d)用相似度评价软件评价17个样品的指纹图谱，从中确定一个标准指纹图谱。步骤二：用上述相同的方式获得一个待评价样品的指纹图谱；步骤三：用前述相似度评价软件评价所述待评价样品指纹图谱和所述标准指纹图谱的相似度，相似度大于0.9则判定所述待评价样品质量符合要求。

进一步地，所述标准指纹图谱包含以下15个特征峰，其中10号峰为参照峰，其相对保留时间和相对峰面积为1.00，各峰的相对保留时间分别为：8.07、12.22、 20.11、20.74、25.17、26.56、27.00、28.32、32.58、35.76、38.46、40.35、41.06。