[发明专利]黄花列当指纹图谱建立方法

权利要求书

1.一种建立黄花列当药材指纹图谱的方法，包括以下步骤：

建立标准指纹图谱，包括：a)分别从10批以上不同产地的样品制备供试品溶液：取黄花列当药材粉末，加70％甲醇，称定重量，浸泡，超声处理，用溶剂补足减失的重量，滤过，取续滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，备用；b)对照品溶液的制备：称取1)α-L-鼠李糖(1→3)[β-D-葡萄糖(1→6)]-O-(4-O-咖啡酰)-D-葡萄糖咖啡酰三糖苷、2)芥子酸-4-O-β-D葡萄糖苷、3)7-羟基毛蕊花糖苷、4)7-甲氧基毛蕊花糖苷、5)毛蕊花糖苷、6)圆齿列当苷、7)3’-甲氧基毛蕊花糖苷)、8)2’-乙酰毛蕊花糖苷、9)异圆齿列当苷共9种对照品，用甲醇溶解定容，制成一定浓度的混合溶液，微孔滤膜0.45μm滤过，备用；c)先后将各供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪中，分别获得指纹图谱，色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：乙腈(A)-1‰磷酸水溶液(B)，梯度洗脱89％B(0min)～85％B(13min)～81％B(22min)～78％B(33min)～76％B(50)min；流速：1ml/min；检测波长230～400nm；柱温20～30℃；进样量5～15μl；d)用相似度评价软件评价17个样品的指纹图谱，从中确定一个标准指纹图谱。

2.如权利要求1所述的方法，其中，色谱柱采用规格为250mm×4.6mm，5μm的岛津Inertsil ODS-SP HPLC色谱柱或者YMC-Pack ODS-A色谱柱。

3.如权利要求1所述的方法，其中，步骤a)中，取黄花列当药材粉末0.15g，加70％甲醇25ml，称定重量，浸泡1h，超声处理40min，用溶剂补足减失的重量，滤过，取续滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，备用。

4.如权利要求3所述的方法，其中，流速为1ml/min；检测波长295nm；柱温25℃；进样量10μl。

5.如权利要求4所述的方法，其中，所述标准指纹图谱包含以下15个特征峰，其中10号峰为参照峰，其相对保留时间和相对峰面积为1.00，各峰的保留时间分别为：8.07、8.34、11.02、12.22、20.11、20.74、25.17、26.56、27.00、28.32、32.58、35.76、38.46、40.35、41.06。

6.如权利要求5所述的方法，其中，所述标准指纹图谱的15个特征峰的相对峰面积分别为0.0035、0.0053、0.0038、0.0099、0.0114、0.0086、0.0073、0.0041、0.0042、1.000、0.1995、0.0363、0.0546、0.0086、0.003711。