[发明专利]共表达抗EGFRvIII嵌合抗原受体和无功能EGFR受体的转基因淋巴细胞及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地，本发明涉及一种T淋巴细胞、一种慢病毒、一种转基因淋巴细胞、一种构建体、一种用于治疗癌症的治疗组合物和一种提高淋巴细胞治疗安全性的方法。

背景技术

脑胶质母细胞瘤是恶性度最高的脑瘤，占中枢神经系统恶性肿瘤的～81％，恶性胶质瘤的发病率为3-6/10万,每年中国因此病死亡人数为3万人。恶性胶质瘤呈浸润性生长，与正常脑组织无明显界限，并且多数不限于一个脑叶，呈指状深入破坏脑组织，手术不可能完全切除。虽然母前采用了最为积极的治疗手段，但中位生存期仍只有<15个月，单独使用放疗，仅有不足1％的患者可以存活5年，即使新出现的放疗与替莫唑胺(TMZ)化疗的联用方案，也只使近10％患者存活至5年以上。

由此可见，开发有效治疗脑胶质母细胞瘤的方法尤为迫切.

发明内容

本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：

EGFR突变体EGFRvIII(EGFR胞外段的267个氨基酸被去除，其是由EGFR基因的第2～7个外显子(275～1075位核苷酸)去除后的基因编码的)在约30％的胶质母细胞瘤患者中表达，但在正常组织中未检测到，因此，EGFRvIII可代表胶质母细胞瘤的特异性突变。

无功能EGFR受体缺少N-端配体结合区和细胞内受体酪氨酸激酶活性，但包括野生型EGFR受体的跨膜区和完整的与抗EGFR抗体结合的序列，无功能EGFR受体可作为淋巴细胞的自杀标记。

基于上述发现，发明人提出了一种编码无功能EGFR的核酸分子和编码嵌合抗原受体的核酸分子的构建体和一种以此构建体导入后形成的转基因淋巴细胞，其编码的嵌合抗原受体特异性结合抗原EGFRvIII。因此，本发明提出的构建体和转基因淋巴细胞具有对脑胶质母细胞瘤细胞的特异杀伤能力，并且免疫杀伤安全性高。

在本发明的第一方面，本发明提出了一种T淋巴细胞。根据本发明的实施例，所述T淋巴细胞的表达无功能EGFR受体；以及表达嵌合抗原受体，其中，所述嵌合抗原受体包 括：胞外区，所述胞外区包括单链抗体的重链可变区和轻链可变区，所述单链抗体特异性识别抗原EGFRvIII；跨膜区，所述跨膜区与所述胞外区相连，并且嵌入到所述T淋巴细胞的细胞膜中；胞内区，所述胞内区与所述跨膜区相连，并且所述胞内区包括CD28或4-1BB的胞内段以及CD3ζ链。无功能EGFR受体缺少N-端配体结合区和细胞内受体酪氨酸激酶活性，但包括野生型EGFR受体的跨膜区和完整的与抗EGFR抗体结合的序列，无功能EGFR受体可作为淋巴细胞的自杀标记。本发明实施例的T淋巴细胞具有对EGFRvIII突变的脑胶质母细胞瘤的定向杀伤作用，且安全性高。

在本发明的第二方面，本发明提出了一种慢病毒。根据本发明的实施例，所述慢病毒携带下列核酸分子：编码嵌合抗原受体的核酸分子，所述嵌合抗原受体具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述编码嵌合抗原受体的核酸分子具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；以及编码无功能EGFR受体的核酸分子，所述无功能EGFR受体具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，所述编码无功能EGFR受体的核酸分子具有SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。