[发明专利]用于检测高毒力艰难梭菌菌株的存在的方法

权利要求书

1.引物组在制备用于进行在生物样品中检测高毒力艰难梭菌(Clostridiumdifficile)菌株的存在的方法的试剂盒中的用途，所述方法包括：

进行核酸扩增反应，其包含自所述生物样品提取的DNA作为模板、在所述反应中引发和扩增艰难梭菌hydR基因中目标序列的第一寡核苷酸引物组、和在所述反应中引发和扩增对应于SEQ ID NO:2所列的艰难梭菌序列的目标序列的第二寡核苷酸引物组，其中所述hydR基因包含对应于SEQ ID NO:1的序列，其中所述第一寡核苷酸引物组含有包含如SEQ IDNO:3所列的核苷酸序列的寡核苷酸，以及包含如SEQ ID NO:4所列的核苷酸序列的寡核苷酸，和

其中所述第二寡核苷酸引物组含有包含如SEQ ID NO:5所列的核苷酸序列的寡核苷酸，以及包含如SEQ ID NO:6所列的核苷酸序列的寡核苷酸。

2.根据权利要求1的用途，其包括在所述生物样品中检测高毒力艰难梭菌菌株存在的步骤，其中当所述第一寡核苷酸引物组不扩增出特异性产物并且所述第二寡核苷酸引物组扩增出特异性产物时，在所述样品中检出所述高毒力艰难梭菌菌株。

3.根据权利要求1或2的用途，其中所述高毒力艰难梭菌菌株是艰难梭菌菌株027或者027-核糖核酸型-类似艰难梭菌菌株(027-ribotype-resembling Clostridium difficilestrain)。

4.根据权利要求1或2的用途，其中所述样品中艰难梭菌hydR基因DNA的存在指示艰难梭菌菌株027不存在于所述样品中。

5.根据权利要求1或2的用途，其中对于所述第一寡核苷酸引物组的艰难梭菌特异性目标序列是如SEQ ID NO:1所列的艰难梭菌hydR基因的核苷酸区域，并且所述核苷酸区域的至少部分被特异性扩增。

6.根据权利要求5的用途，其中所述第一寡核苷酸引物组含有由如SEQ ID NO:3所列的核苷酸序列组成的寡核苷酸，以及由如SEQ ID NO:4所列的核苷酸序列组成的寡核苷酸。

7.根据权利要求1或2的用途，其中通过使用包含如SEQ ID NO:7所列的核苷酸序列或由如SEQ ID NO:7所列的核苷酸序列组成的探针来检测所述第一寡核苷酸引物组扩增的目标序列的存在。

8.根据权利要求7的用途，其中通过使用由如SEQ ID NO:7所列的核苷酸序列组成的探针来检测所述第一寡核苷酸引物组扩增的目标序列的存在。

9.根据权利要求1的用途，其中所述第二寡核苷酸引物组含有由如SEQ ID NO:5所列的核苷酸序列组成的寡核苷酸，以及由如SEQ ID NO:6所列的核苷酸序列组成的寡核苷酸。

10.根据权利要求1的用途，其中通过使用包含SEQ ID NO:8或9所列的核苷酸序列或由SEQ ID NO:8或9所列的核苷酸序列组成的探针来检测用所述第二寡核苷酸引物组扩增的目标序列的存在。

11.根据权利要求1的用途，其中所述扩增反应还包含在所述反应中对于扩增艰难梭菌毒素B基因(tcdB)特异性的第三寡核苷酸引物组，并且在所述反应中特异性扩增出如SEQID NO:10所列的核苷酸区域的至少部分。

12.根据权利要求11的用途，其中所述第三寡核苷酸引物组含有由如SEQ ID NO:11所列的核苷酸序列组成的寡核苷酸，以及由如SEQ ID NO:12所列的核苷酸序列组成的寡核苷酸。

13.根据权利要求11的用途，其中通过使用包含如SEQ ID NO:13所列的核苷酸序列或由如SEQ ID NO:13所列的核苷酸序列组成的探针来检测所述第三寡核苷酸引物组扩增的目标序列的存在。