[发明专利]用于检测样品中细菌ATP的包含ATP-二磷酸水解酶的试剂盒

权利要求书

1.一种试剂盒，其包含：

具有6.0至7.2的pH的水性组合物，所述组合物包含有效量的多元醇、缓冲试剂、蛋白质和ATP-二磷酸水解酶，其中所述ATP-二磷酸水解酶以250单位/升至2500单位/升的浓度存在于所述水性组合物中。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其还包含体细胞提取剂。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其条件是所述组合物不包含有效量的杀微生物化合物。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其条件是所述组合物不包含有效量的二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇或β-巯基乙醇。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其还包含荧光素酶活性物。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中所述荧光素酶活性物与所述水性组合物隔离。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述水性组合物的pH为6.4至7.0。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述多元醇选自山梨醇、木糖醇、甘油及其混合物。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其中所述多元醇包括山梨醇，其中所述山梨醇以1摩尔/升至1.6摩尔/升的浓度存在于所述水性组合物中。

10.根据权利要求1所述的试剂盒，其中水性组合物包含有效量的体细胞提取剂。

11.根据权利要求2或权利要求10所述的试剂盒，其中所述体细胞提取剂包括非离子表面活性剂。

12.根据权利要求11所述的试剂盒，其中所述体细胞提取剂选自聚乙二醇对(1,1,3,3-四甲基丁基)-苯基醚和聚乙二醇单烷基醚。

13.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述缓冲试剂包括HEPES和Tris琥珀酸盐的混合物。

14.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述缓冲试剂以0.5mM至200mM的浓度存在于所述水性组合物中。

15.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述蛋白质选自血清白蛋白和纯化的胶原蛋白。

16.根据权利要求1所述的试剂盒，其还包含细菌细胞提取剂。

17.一种在大于0℃储存至少7天的水性组合物中保留大于或等于90％的初始ATP-二磷酸水解酶活性的方法，所述方法包括：

形成具有6.0至7.2的pH的水性组合物，所述组合物包含有效量的多元醇、缓冲试剂、蛋白质和ATP-二磷酸水解酶；以及

将所述水性组合物于包括端值在内的1-25℃之间的温度下储存至少7天的时间段；

其中所述水性组合物在第一时间点具有初始ATP-二磷酸水解酶活性；

其中所述pH和所述有效量的多元醇、缓冲试剂、蛋白质和ATP-二磷酸水解酶的组合使得所述组合物保持在25℃下从所述第一时间点直到所述第一时间点后至少7天的第二时间点之后能够保留大于或等于90％的所述初始ATP-二磷酸水解酶活性；

其中所述ATP-二磷酸水解酶活性是在pH 7.75并使用非限速浓度的ATP、荧光素和荧光素酶的条件下用生物发光偶联测定法在25℃下测量的。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述pH和所述有效量的多元醇、缓冲试剂、蛋白质和ATP-二磷酸水解酶的组合使得所述组合物保持在25℃下从所述第一时间点直到所述第二时间点之后能够保留大于或等于95％的所述初始ATP-二磷酸水解酶活性。

19.一种定量样品中细菌ATP的方法，所述方法包括：

形成包含样品和水性组合物的第一混合物；

其中所述水性组合物具有6.8至7.2的pH，并且包含有效量的多元醇、缓冲试剂、蛋白质和ATP-二磷酸水解酶；

将所述第一混合物在预先确定的温度下保持第一时间段；

将所述第一混合物与细菌细胞提取剂、荧光素酶、荧光素和缓冲试剂组合以形成具有7.75的pH的第二混合物；以及

测量荧光素酶催化的生物发光反应。