[发明专利]重组载体、含有其的工程菌及在产α-酮戊二酸的应用

权利要求书

1.一种重组载体，其特征在于，含有L-谷氨酸氧化酶的编码基因和过氧化氢酶的编码基因。

2.如权利要求1所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为将所述L-谷氨酸氧化酶的编码基因和过氧化氢酶的编码基因插入表达载体上得到的重组载体。

3.如权利要求2所述的重组载体，其特征在于，所述表达载体为质粒。

4.如权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述质粒为pBAD-hisB。

5.一种产α-酮戊二酸的基因工程菌，包含L-谷氨酸氧化酶的编码基因和过氧化氢酶的编码基因。

6.如权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌为将含有L-谷氨酸氧化酶编码基因和过氧化氢酶编码基因的重组载体导入宿主菌得到的。

7.如权利要求6所述的基因工程菌，其特征在于，所述宿主菌为能使所述重组表达载体稳定地自行复制且其携带的L-谷氨酸氧化酶的编码基因和过氧化氢酶的编码基因可被有效表达的常规宿主细胞。

8.如权利要求7所述的基因工程菌，其特征在于，所述宿主菌为大肠杆菌或大肠杆菌的基因敲除突变体，所述大肠杆菌的基因敲除突变体为将大肠杆菌中α-酮戊二酸脱氢酶E1基因敲除后获得的大肠杆菌。

9.如权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于，所述L-谷氨酸氧化酶的编码基因来源于茂源链霉菌Streptomyces mobaraesis，所述过氧化氢酶的编码基因来源于Proteusmirabilis。

10.如权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于，所述L-谷氨酸氧化酶的编码基因为核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的基因，所述过氧化氢酶的编码基因的核苷酸为核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示的基因。

11.如权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于，

所述L-谷氨酸氧化酶为氨基酸序列为SEQ ID NO：1所示的蛋白质；

所述过氧化氢酶为氨基酸序列为SEQ ID NO：3所示的蛋白质。

12.一种产α-酮戊二酸的基因工程菌的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求1至3中任一所述的重组载体导入到宿主菌中。

13.如权利要求12所述的制备方法，其特征在于，所述宿主菌为大肠杆菌或大肠杆菌的基因敲除突变体，所述大肠杆菌的基因敲除突变体为将大肠杆菌中α-酮戊二酸脱氢酶E1基因敲除后获得的大肠杆菌。

14.如权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述重组载体中的L-谷氨酸氧化酶的编码基因来源于茂源链霉菌Streptomyces mobaraesis，所述重组载体中的所述过氧化氢酶的编码基因来源于Proteus mirabilis。

15.如权利要求14所述的制备方法，其特征在于，所述L-谷氨酸氧化酶的编码基因为核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的基因，所述过氧化氢酶的编码基因的核苷酸为核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示的基因。

16.如权利要求15所述的制备方法，其特征在于，所述L-谷氨酸氧化酶为氨基酸序列为SEQ ID NO：1所示的蛋白质；

所述过氧化氢酶为氨基酸序列为SEQ ID NO：3所示的蛋白质。

17.一种产α-酮戊二酸的方法，其特征在于，利用权利要求5至11中任一所述的基因工程菌催化L-谷氨酸或其盐来生成α-酮戊二酸。