[发明专利]一种从柞蚕中分离的白僵菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物农药制剂，具体的涉及一种从柞蚕中分离的白僵菌及其应用，更具体的涉及从柞蚕中分离的白僵菌、白僵菌的分离方法及其在制备生物农药制剂中的应用。

背景技术

白僵菌(Beauveriabassiana)是一种半知菌类的虫生真菌，具有营养器官-菌丝和繁殖器官-分生孢子，菌丝有横隔有分枝。白僵菌的分布范围很广，从海拔几米至2000多米的高山均发现过白僵菌的存在，可侵入15个目149个科521个属的700多种昆虫及螨类的虫体内大量繁殖，同时不断产生白僵素和草酸钙结晶，这些物质可引起昆虫中毒，使体液机能发生变化，打乱新陈代谢以致死亡。所谓白僵虫就是白僵菌的分生孢子落在昆虫体上，在合适温湿条件下，即可发芽直接侵入昆虫体内，以昆虫体内的血细胞及其他组织细胞作为营养，大量增殖，以后菌丝穿出体表，产生白粉状分生孢子，从而使害虫呈白色僵死状，称为白僵虫。

由于白僵菌具有符合生物制剂的一些基本要求、即对温血动物和植物无害、容易培养、致病力强、防治害虫效果好和广谱等优点，寄主广泛，高度致病性与适应性，使得其菌种在农、林害虫的生物防治中得到广泛运用。

蛴螬是金龟甲的幼虫，别名白土蚕、核桃虫。成虫通称为金龟甲或金龟子。危害多种植物和蔬菜。按其食性可分为植食性、粪食性、腐食性三类。其中植食性蛴螬食性广泛，危害多种农作物、经济作物和花卉苗木，喜食刚播种的种子、根、块茎以及幼苗，是世界性的地下害虫，危害很大。

发明人首次从柞蚕僵蚕中分离出一种白僵菌，经测序显示其与菌株Beauveriabassiana(GenBank:KM205065.1)的相识度为99％。进一步的致病性结果显示，从柞蚕僵蚕上分离出的白僵菌具有很好的杀虫效果。本发明提供了一株新的白僵菌菌株，具有很好的实际应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种从柞蚕僵蚕中分离出的白僵菌菌株[Beauveriavuillemin]，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通生物中心，保藏日期：2015年8月24日，保藏编号：CGMCCNo.11272。

进一步，所述白僵菌菌株ITS序列为序列表SEQIDNO.3。

本发明的目的在于提供一种微生物制剂，所述微生物制剂中含有上述白僵菌菌株。

进一步，所述微生物制剂中含有上述白僵菌的菌丝和/或分生孢子和/或白僵素和/或纤细素和/或卵孢素。

白僵菌是一种半知菌类的虫生真菌，具有营养器官(菌丝)和繁殖器官(分生孢子)，菌丝有横隔有分枝。白僵菌分生孢子在寄主表皮或气孔、消化道上，遇适宜条件开始萌发，出生芽管。同时产生脂肪酶、蛋白酶、几丁质酶溶解昆虫的表皮，由芽管入侵虫体，在虫体内生长繁殖，消耗寄主体内养分，形成大量菌丝和孢子，布满虫体全身。同时产生各种毒素，如白僵菌素(Beauvericin)，纤细素(Tenellin)和卵孢素(Oosporein)等。白僵菌素是从球孢白僵菌(Beauveriabassiana)菌丝体内纯化出来的。该毒素是一环状三羧酸肽，由3个相同的D2α2羟异戊基-L-N-苯基组成的环状化合物。该毒素为白色针状晶体，耐热、较稳定，100℃下1h仍保持毒性。该毒素可致细胞核变形、组织崩解。

更进一步，述微生物制剂中含有辅料或助剂。优选的，所述的助剂是润湿剂、分散剂或稳定剂。

本发明的目的在于提供一种从柞蚕僵蚕中分离白僵菌的方法，具体步骤为：

1)采集被白僵菌侵染后的柞蚕僵蚕，消毒后用无菌水冲洗；

2)采用无菌操作取出僵虫体内组织放置到固体培养基上，置于5-30℃恒温培养箱中培养1-7d；

3)待长出菌落，挑取少量菌丝体制片观察，进行初步鉴定。

优选的，一种从柞蚕僵蚕中分离白僵菌的方法，具体步骤为：

1)野外采集到的被白僵菌侵染后的柞蚕僵蚕，用升汞溶液浸泡10-120s，倒去升汞溶液后用无菌水冲洗；

2)用无菌镊子夹取，放置于灭过菌的培养皿中，用无菌解剖刀将僵虫切开，取出体内组织放置到固体PDA培养基上，最后将平板放置于5-30℃恒温培养箱中培养1-7d；

3)待长出菌落，挑取少量菌丝体制片观察，进行初步鉴定。将平板放置于23-28℃恒温培养箱中培养。

优选的，所述升汞溶液为0.1％m/v升汞溶液。