[发明专利]兔特异性引物、试剂盒及其在兔源性成分鉴定中的应用

说明书

本发明提供了一种兔特异性引物、试剂盒及其在兔源性成分鉴定中的应用，属于动物种源性成分分子检测技术领域。本发明中，兔特异性引物是能特异性扩增SEQ ID No.1所示的核苷酸序列或该序列的特异性片段的引物对SEQ ID No.2&3。本发明试剂盒包括所述兔特异性引物、反应试剂以及阳性和空白对照。采用本发明的引物扩增样品DNA，对PCR扩增产物进行分析，可判定样品中是否含有兔源性成分。本发明为肉制品和毛皮中兔源性成分的检测提供了有效、精准、可靠的手段，具有简便、快速、全面、特异性强的特点，且成本较低，适用性广。

技术领域

本发明涉及动物分子生物学领域，具体涉及兔特异性引物、试剂盒及其在兔源性成分鉴定中的应用。

背景技术

兔肉性凉味甘，在国际市场上享负盛名，被称之为“保健肉”、“荤中之素”、“美容肉”、“百味肉”等等。兔肉质地细嫩，味道鲜美，营养丰富，与其它肉类相比较，具有很高的消化率(可达85％)，食后极易消化吸收。因此，兔肉极受消费者的喜爱。

随着人民生活水平的提高，兔肉消费量的增加，市场上开始出现各种兔肉制品掺假的现象，因此兔肉制品来源的安全性成为消费者关心的焦点，而对肉制品的来源进行鉴定并建立便捷的检测方法是解决这一问题的关键。科学家针对进化上较不保守的线粒体DNA，利用NCBI核酸序列数据库，通过比对各种动植物的线粒体Cytb基因序列，设计不同物种的特异性引物来进行物种种源鉴定。Cristina G.Santos采用这种方法设计了野兔的线粒体Cytb基因特异性引物并进行了检测，但由于线粒体DNA的高度变异性，该特异性引物只能对少数野兔种进行鉴别，是否可用于家兔的鉴定未见研究报道。因此，如何有效、准确地判别肉制品是否含有兔源性成分，并建立一种简单易行的检测方法是十分必要的。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术不足，提供一种可用于兔源性制品特异性检测的引物；

本发明的第二个目的在于提供用于兔源性制品检测的检测试剂盒；

本发明的目的还在于提供兔源性成分的鉴定方法。

为实现上述目的，本发明从种内一致性和稳定性、种间特异性、拷贝数等方面进行兔基因组特异DNA序列的筛选，经过普通牛、水牛、羊(绵羊、山羊)、猪、马、驴、鼠(大鼠、小鼠、仓鼠)、豚鼠、鸡、鸭、鹅、兔、狗、狐、水貂和貉子的基因组DNA及不同的兔品种DNA中的检测，筛选在兔中特意的、在其他物种中不存在或同源性低的DNA片段作为检测分子。经过大量分析和实验工作，最终获得可供检测使用的特异DNA序列，其核苷酸序列如序列表SEQ IDNo.1所示。

基于此，本发明首先提供一种兔特异性引物，其能特异性扩增SEQ ID No.1所示的核苷酸序列或该序列的特异性片段。

优选地，引物长度为18～27bp。引物的设计需要考虑是否容易发生错配、扩增片段长度、反应温度等多方面。

优选地，该引物序列如下：

OCU-F：5′-TAGCAGTAGGGATGACAGGGTTT-3′

OCU-R：5′-GCCTTAGAGTAGGGTCTTTTTGG-3′；

或该引物向5′、3′端延伸或修饰得到的仍能特异性扩增SEQ ID No.1所示序列的引物。

进一步本发明提供含有上述特异性引物的检测试剂盒。

优选地，所述试剂盒还包括下述试剂中的一种或多种：Taq酶、dNTPs、MgCl₂、PCR缓冲液、阳性对照DNA模板、双蒸水；或者还包括下述试剂中的一种或多种：Taq DNAMasterMix、阳性对照DNA模板、双蒸水。

所述阳性对照DNA模板为兔科兔属的兔基因组DNA模板；