[发明专利]一种定性检测水稻耐消化淀粉含量的方法

说明书

本发明公开了一种定性检测水稻耐消化淀粉含量的方法，该方法包括：以待测水稻的基因组DNA为模板，采用如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的引物对进行PCR扩增；若所述水稻为籼稻时，扩增产物包含106bp和473bp两种条带，若所述水稻为粳稻时，扩增产物包含93bp、106bp和380bp三种条带，则说明待测水稻中耐消化淀粉含量高于25％，否则，耐消化淀粉含量低于25％。本发明方法可从F₂苗期进行耐消化淀粉含量高的水稻品种的筛选，既加快了育种进度又节省了种植成本，并且可以对目标性状逐代追踪，在回交过程中不易丢失目标性状。

技术领域

本发明涉及水稻基因分子标记技术领域，尤其涉及一种定性检测水稻耐消化淀粉含量的方法。

背景技术

谷物淀粉是人类生存所需能量的主要来源，其中，水稻是当今世界1/2人口的主粮，水稻的生产在我国举足轻重。经过育种工作者的不懈努力，我国在水稻生产上取得了巨大的进步，杂交育种技术日益成熟，水稻的食味、蒸煮品质不断提升。而伴随人民温饱问题的解决，生活水平的提高，具有调控血糖功能的功能型水稻成为水稻育种的新方向。

淀粉作为血糖的直接供给来源，其消化特性也不断为人们所认知。按消化特性，1992年Englyst等将淀粉分类为快消化淀粉(RDS)，缓慢消化淀粉(SDS)和抗性淀粉(RS)，该分类方法是由Englyst根据生理解剖分析得出的。其中，快消化淀粉为进食后20min内可被消化的淀粉；缓慢消化淀粉是进食后20～120min之间被消化的淀粉；而进食120min后不被消化，不在小肠内消化吸收，却在大肠中发酵的则是抗性淀粉。由于缓慢消化淀粉(SDS)和抗性淀粉(RS)对于人体均有益，所以，我们定义耐消化淀粉(Endurance Starch,ES)为缓慢消化淀粉(SDS)和抗性淀粉(RS)之和，即ES＝SDS+RS；或者ES＝TS(总淀粉)-RDS(抗性淀粉)。

2002年Ludwig临床研究表明，控制餐后血糖平稳对于人体健康大有脾益，长期食用快消化淀粉含量高的食物会导致餐后血糖指数迅速升高，相关激素分泌调控压力变大，进而导致糖尿病、心血管疾病和肥胖等诸多慢性疾病的发生。同时，由于谷物抗性淀粉含量较低，血糖调控能力有限，提高耐消化淀粉含量，成为稳定餐后血糖的主要途径。

目前，水稻耐消化淀粉含量的测定采用Englyst方法或者AACC方法，对于杂交后代育种材料，上述方法一般都需要获得F₃代后才能进行耐消化品质检测；增加了育种成本和育种的工作量。分子标记辅助选择(Marker-assisted selection,MAS)技术给水稻育种提供了新的途径，可通过该技术筛选水稻中耐消化淀粉含量高的材料，并将其用于杂交育种中稻米食味品质和缓慢消化功能特性的组合育种中，显著加快了优质功能型水稻的育种进度。

现有研究表明，自然稻米米粉的ES含量在11.0％～24.2％之间(Patindol,J.,Guraya,H.,Champagne,E.,Chen,M.H.,&McClung,A.2010.Relationship of cooked‐ricenutritionally important starch fractions with other physicochemicalproperties.Starch‐62(5),246-256)，日本晴(粳稻)和R7954(籼稻)的ES含量分别为17.4％和20.0％，而浙江大学通过钴-60伽玛射线诱变常规水稻筛得的一份耐消化淀粉含量高的水稻株系es1的耐消化淀粉含量高达28.7％。

因此，有必要通过分子标记辅助选择技术获取上述水稻株系es1中与高耐消化淀粉含量性状连锁的分子标记，以改善现有技术中常规耐消化淀粉含量测定方法育种成本高、育种进度慢的问题，为加快优质功能型水稻的育种进度提供保障。

发明内容