[发明专利]可特异性结合脱氧雪腐镰刀菌烯醇的多肽分子及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，涉及可特异性结合脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalneol,DON)的多肽分子及其应用，该多肽分子的氨基酸序列为CAHHGIPQC。本发明采用液相亲和淘选并结合DON抗体竞争性洗脱的方式，快速淘选获得可特异性结合DON的多肽分子，所述的多肽分子可以替代传统的DON抗体并应用于DON的免疫学分析体系中，并具有更好的酸碱耐受及热稳定性，该多肽分子的获得无需免疫过程、制备简单、成本低、周期短，该多肽分子既可通过生物培养的方式大量扩增，也可以通过化学合成或者基因工程的方法进行大量制备，为DON抗体的制备提供了新的路径，具有较好的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及可特异性结合脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalneol,DON)的多肽分子及其应用。

背景技术

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalneol,DON)，又称为呕吐毒素(Vomitoxin)，属单端孢烯族化合物，由于它可引起猪的呕吐而得名，对人体也具有一定的危害，欧盟分类标准为三级致癌物。DON主要由镰刀菌产生，广泛存在于大麦、小麦、玉米、燕麦和大米等农作物及其制品中。DON具有细胞毒性、胚胎毒性和免疫毒性等，可引起厌食、呕吐、腹泻、发烧和生长缓慢等症状，严重威胁人类及动物的健康。由于DON的高污染率和高毒性，对食品中DON的检测具有重要意义。

目前比较常用的检测DON的方法主要包括：高效液相色谱法(High performanceliquid chromatography，HPLC)，气相色谱法(Gaschromatography，GC)，薄层层析法(Thinlayer chromatography，TLC)，高效液相色谱-质谱联用法(High performance liquidchromatography-mass sepectrum，HPLC-MS)，微生物检测法和免疫检测法等，其中免疫学分析方法以其灵敏度高、操作简单以及可实现规模化筛选等优点，在DON的快速检测领域中得到了广泛的应用。

免疫学分析方法的核心在于抗原-抗体间的特异性识别及结合，因此制备特异性结合抗原的抗体就成为发展免疫学分析方法的前提与核心。抗体的研究近年来发展迅猛，已经从传统的多克隆、单克隆抗体，发展至以单链抗体、噬菌体展示抗体、单域重链抗体、抗独特型抗体等为代表的基因工程抗体领域。相比于传统抗体制备必须经历动物免疫、细胞融合、阳性克隆筛选等复杂程序，基因工程抗体以其可定向改造、淘选方便等优点已成为目前研究的热点。除此以外，近年来包括我国在内的众多学者已经开始着眼于不以免疫球蛋白为主体组成结构的新型抗体研究，例如基于SELEX技术的核酸适配体、基于分子印迹聚合体技术的人工抗体以及基于Lipocalin蛋白家族的抗体类似物等都取得了可喜的进展，为传统抗体的替代性研究提供了扎实的理论和方法学基础。纵观抗体的发展动态，可以看出新型抗体具有分子量小、结构简单、可自我进化、制备快捷的特点及发展趋势。例如，单克隆抗体、单链抗体、单域重链抗体的分子量逐渐减少，分别为150、30-50、15-20kDa，以Lipocalin 为骨架蛋白的抗体类似物为18-20kDa，而核酸适配体则仅为一小段核酸序列。