[发明专利]一种融合细胞及其制备方法和其作为肿瘤疫苗的应用

说明书

本发明公开了一种融合细胞及其制备方法和其作为肿瘤疫苗的应用，该方法包括以下步骤：(1)制备NDV‑Ulster病毒株修饰的肿瘤细胞；(2)制备采用磷酸抗原或双膦酸盐类药物刺激活化的新型抗原递呈细胞γδT‑APC；(3)制备γδT‑APC和NDV‑Ulser修饰的肿瘤细胞的融合细胞；(4)纯化融合细胞；(5)融合细胞的培养；(6)融合细胞产品的制备。本发明方法能得到更多的新型抗原递呈细胞γδT‑APC，γδT‑APC和经过修饰的肿瘤细胞的融合率高，本发明所得融合细胞的肿瘤抗原效价更完整、免疫源性更强、肿瘤抗原负载率高。

技术领域

本发明涉及一种融合细胞及其制备方法和该融合细胞作为肿瘤疫苗的应用，尤其是涉及一种采用新型抗原递呈细胞γδT-APC和新城鸡瘟病毒株NDV-Ulser修饰的肿瘤细胞融合制备融合细胞的方法，还涉及所得融合细胞作为肿瘤疫苗的应用。

背景技术

树突状细胞(以下称为Dendritic Cell,DC)作为专职抗原递呈细胞在诱导抗病原微生物和抗肿瘤的免疫应答中起至关重要的作用。以DC为基础的抗癌疫苗在临床试验中也日益受到广泛的关注。为了获得肿瘤特异性疫苗，研究者们采用了多种策略来研制基于DC细胞的肿瘤疫苗，以激发抗肿瘤特异性免疫应答。临床试验中应用的DC疫苗主要包括抗原负载的DC细胞疫苗、基因修饰的DC细胞疫苗等。但令人失望的是，在这些DC疫苗的临床试验中，仅有很少的患者接受上述DC细胞疫苗治疗后出现客观应答反应。其原因主要在于：一是对于各种肿瘤已经确定的特异性肿瘤抗原极少，肿瘤细胞也容易通过抗原变异逃避针对单一抗原表位的免疫作用；二是由于提取的肿瘤蛋白抗原在体内容易被蛋白质水解酶降解，诱导的免疫效应不能持久，难以获得理想的治疗效果；三是基因修饰法制备的DC细胞肿瘤疫苗，受基因导入效率和基因转移的靶向性等技术难题的影响；四是DC的的细胞疫苗还受到DC细胞的数量少、纯度低以及DC和肿瘤细胞的免疫源性差等的影响。对于DC融合细胞来说，理论上所有的肿瘤细胞抗原都能够有效地进入抗原递呈途径，免疫源性TAA或TSA肽在共刺激分子存在下由MHCI和MHCII递呈到细胞表面。而且融合细胞能够迁移到肿瘤引流淋巴结，在那里它们能直接与CD4+T和CD8+T细胞直接进行相互作用，诱导强烈的抗肿瘤免疫应答。另外，宿主DC细胞也可以摄取死亡的融合细胞释放的TAAs并依靠其表面MHCI和MHCII分子递呈同时活化CD4+和CD8+T细胞。DC的融合细胞疫苗虽然可以涵盖所有已知和未知的肿瘤特异性抗原及肿瘤相关抗原库，但DC融合细胞疫苗也受DC细胞数量和纯度及肿瘤细胞的免疫源性等的影响，因此，上述DC肿瘤疫苗在临床上的效果往往并不理想。