[发明专利]番石榴炭疽病菌特异性PCR检测引物及其检测方法有效
| 申请号： | 201510512826.0 | 申请日： | 2015-08-20 |
| 公开（公告）号： | CN105063219B | 公开（公告）日： | 2018-06-22 |
| 发明（设计）人： | 兰成忠;姚婂爱;余德亿;阮宏椿;黄鹏 | 申请（专利权）人： | 福建省农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/04;C12R1/645 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350013 福建省福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 番石榴 炭疽病菌 检测引物 检测 特异性PCR 炭疽病 引物 琼脂糖凝胶电泳 发病组织 过程操作 扩增产物 上游引物 特异性强 下游引物 早期诊断 灵敏度 可用 扩增 病菌 田间 监测 防治 | ||
1.番石榴炭疽病菌特异性PCR检测引物，其特征在于：引物序列为：
上游引物CGF：5'- CGGGTAGGGTCTCCGTGA -3'，
下游引物CGR：5'- CCCAGTGCGAGACGTAAAGT -3'；
对番石榴炭疽病菌特异性扩增出390bp的产物。
2.一种利用权利要求1所述引物的番石榴炭疽病菌检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）从感染番石榴炭疽病菌的植物组织中提取DNA；
（2）以步骤（1）提取的DNA为模板，利用CGF/CGR这一对引物进行PCR扩增，PCR扩增的条件为：PCR反应体系25 µL，包括2.5µL 10×PCR buffer，2.0 mmol/L MgCl2，0.2 mmol/LdNTP，1.0 U
（3）取5.0 µL步骤（2）的PCR扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶进行电泳分离，电压为70-100V，40 min后经溴化乙锭染色于紫外灯下观察，根据扩增产物的有无及其片段大小对结果进行判断，如果能特异性地扩增出390 bp的产物，即可判断所述的检测样品中存在番石榴炭疽病菌。
3.如权利要求1所述的引物在田间番石榴炭疽病的早期诊断和病菌的监测及鉴定上的应用。
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