[发明专利]一种基于基因芯片同时鉴定三种伊蚊的探针及试剂盒

说明书

本发明属于生物检测鉴定领域，涉及一种针对白纹伊蚊、埃及伊蚊、东乡伊蚊3种伊蚊的基因芯片检测鉴定探针及试剂盒。本发明公开了一种基于基因芯片同时鉴定三种伊蚊的探针，包括下列三种探针：白纹伊蚊：CTTTAACACTGCTGCTTTCTAGTTC；埃及伊蚊：GTGCTGAACTTAGCCACCCTGGT；东乡伊蚊：AACTCTCCTGCTTTCAAGTAGT。本发明根据不同伊蚊的基因序列，选择基因序列保守位置并设计特异性寡核苷酸检测探针，利用分子生物学的方法进行蚊类鉴别，克服了传统媒介蚊种鉴定方法存在着鉴定专家数量有限、鉴定周期长、鉴定效率低等问题，实现了对白纹伊蚊、埃及伊蚊、东乡伊蚊三种伊蚊快速、准确的鉴定。经过实验检测，本发明的基因芯片及试剂盒特异性强，灵敏度高，可以很好的应用于口岸媒介生物鉴定工作。

技术领域

本发明属于生物检测鉴定领域，涉及一种针对白纹伊蚊、埃及伊蚊、东乡伊蚊3种伊蚊的基因芯片检测鉴定探针及试剂盒。

背景技术

伊蚊，蚊科(Culicidae)库蚊亚科(Culicinae)伊蚊属(Aedes)昆虫的统称。分布于全世界，是蚊科中最大一属，近1000种，中国有100余种。伊蚊会传播很多疾病，对人类的健康带来危害，黄热病与登革热就主要通过伊蚊传播。黄热病是由黄热病病毒引起的急性传染病，埃及伊蚊是主要传播媒介。登革热是一种急性传染病，已知12种伊蚊可传播本病，但最主要的是埃及伊蚊和白纹伊蚊。东乡伊蚊幼虫多孳生在海滨岩穴、石洞以及容器、船舱等的积水中，是马来丝虫病和乙型脑炎的传播媒介。

目前，口岸媒介生物的传统鉴定方法为形态学鉴定方法，主要是依据有形态学鉴定经验、具有媒介生物形态鉴定知识的实验室专业人员根据医学媒介分类检索表进行种类鉴定。受限于鉴定人员的经验积累、专业要求、标本完整性与发育阶段，传统媒介蚊种鉴定方法存在着鉴定专家数量有限、鉴定周期长、鉴定效率低等问题。比如，首先，传统的分类方法在鉴定蚊虫复合体、近缘种存在一定困难；其次，在国境口岸蚊媒监测和交通工具等的卫生检疫工作中，受不同的采集工具、采集方法的影响以及标本运送过程的限制，当专业技术人员鉴定时，许多蚊虫标本已经是残缺不全，往往是腹部鳞片或翅等重要体征脱落或受损，难以进行准确的形态分类；再次，对于截获的卵、幼虫和蛹，整个鉴定过程大致需要数周的时间，由于鉴定特征细微难辨，往往需要培养至成虫再鉴定，如果是少见的国外种类，还要请国外专家协助鉴定，鉴定所需的时间就更多了。

近年来，分子生物学技术的迅速发展，显示了在蚊类鉴别应用中的极大潜力，形成了许多分子鉴别方法，成为解决当前蚊虫分类难题的新钥匙。

基因芯片技术系指将大量探针分子固定于支持物上后与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。基因芯片主要用于基因检测工作。基因芯片技术由于同时将大量探针固定于支持物上，所以可以一次性对样品大量序列进行检测和分析，从而解决了传统核酸印迹杂交技术操作繁杂、自动化程度低、操作序列数量少、检测效率低等不足。目前基于基因芯片鉴定蚊虫报道的技术极少，仅能搜索到赵明等人建立的DNA条形码芯片的初步研究，但是芯片的设计与研制主要通过虚拟电子杂交及验证，结果与实物的杂交还是有很大的差异。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明公开了一种基于基因芯片同时鉴定三种伊蚊的探针，包括下列三种探针：

白纹伊蚊：CTTTAACACTGCTGCTTTCTAGTTC；

埃及伊蚊：GTGCTGAACTTAGCCACCCTGGT；

东乡伊蚊：AACTCTCCTGCTTTCAAGTAGT。

本发明的内容还包括一种用于同时鉴定三种伊蚊的基因芯片，所述基因芯片含有上述三种探针。

本发明的内容还包括一种用于同时鉴定三种伊蚊的基因芯片试剂盒，所述基因芯片含有上述三种探针。