[发明专利]CK19联合OV6在制备肝癌分子分型试剂盒及肝癌个体化治疗中的应用

权利要求书

1.CK19和OV6联用在制备肝癌分子分型标志物中的应用。

2.CK19和OV6联用在制备肝癌分子分型试剂盒中的应用。

3.根据权利要求2所述的CK19和OV6联用在制备肝癌分子分型试剂盒中的应用，其特征在于，所述的肝癌分子分型试剂盒用于鉴别CK19⁺OV6⁺HCC和CK19⁺OV6^-HCC。

4.根据权利要求2或3所述的CK19和OV6联用在制备肝癌分子分型试剂盒中的应用，其特征在于，所述的试剂盒通过免疫组织化学方法检测生物样品中CK19和OV6的表达情况。

5.根据权利要求2或3所述的CK19和OV6联用在制备肝癌分子分型试剂盒中的应用，其特征在于，所述的试剂盒包括特异性识别人CK19的抗体、特异性识别人OV6的抗体，和免疫组化实验试剂。

6.一种肝癌分子分型试剂盒，用于鉴别CK19⁺OV6⁺HCC和CK19⁺OV6^-HCC。

7.根据权利要求6所述的一种肝癌分子分型试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒通过免疫组织化学方法检测生物样品中CK19和OV6的表达情况。

8.一种利用如权利要求6或7所述的肝癌分子分型试剂盒检测肝癌组织中CK19和OV6试剂盒的检测方法，其特征在于，所述的检测方法包括以下步骤：

A.脱蜡至水

(A1)4μm厚石蜡切片，每个肿瘤组织2张连续切片，60℃烤箱烤1h；

(A2)二甲苯10minx3次；

(A3)依次经过100％乙醇、95％乙醇、85％乙醇、75％乙醇、双蒸水，各5min；

B.抗原修复

(B1)3％H₂O₂甲醇液20min；

(B2)双蒸水洗5minx3次；

(B3)抗原修复：切片放入盛有EDTA碱性修复液的高压锅中，高压煮沸2min，自然冷却至室温；

C.一抗孵育

(C1)PBS洗5min；

(C2)50μl1％BSA覆盖组织，37℃封闭30min；

(C3)吸去封闭液，2张连续切片分别滴加CK19、OV6一抗50μl，湿盒中4℃孵育过夜；

D.二抗孵育

(D1)吸走一抗，PBS洗5minx4次；

(D2)滴加50μl带HRP标记的二抗，37℃孵育30-45min；

E.显色、反蓝

(E1)PBS洗5minx4次；

(E2)1:50DAB显色3-10min，至出现砖红色沉淀，双蒸水终止显色；

(E3)苏木素复染10min，盐酸酒精分化后自来水冲洗反蓝20-30min；

F.脱水封片

依次经过双蒸水、75％乙醇、85％乙醇、95％乙醇、100％乙醇、石炭酸、二甲苯，各5min，滴加树脂封片；

G.分析

显微镜下判读CK19和OV6的表达是否为阳性。

9.src抑制剂在制备治疗肝癌药物中的应用，其特征在于，所述的肝癌是指CK19⁺OV6⁺HCC细胞。

10.根据权利要求9所述的src抑制剂在制备治疗肝癌药物中的应用，其特征在于，所述的src抑制剂是指Dasatinib。