[发明专利]一种鉴定玉米品种的PCR方法及其应用

说明书

本发明公开了一种鉴定玉米品种的PCR方法及其应用。包括如下步骤：94℃预变性2min，1个循环；94℃变性2s，60℃退火15s，72℃延伸2s，共35个循环；72℃延伸2min。通过实验证明：本发明的快速PCR方法无需专用的快速PCR试剂，通过耶拿SpeedCycler 2 PCR仪即可快速实现对玉米品种的鉴定。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鉴定玉米品种的PCR方法及其应用。

背景技术

PCR技术发明至今已有二十多年的时间，用于PCR实验的仪器不断的推陈出新，但运行一个完整的PCR实验一般为2～3个小时，PCR实验运行时间过长的问题始终困扰着研究人员。快速PCR这一概念是由美国犹他大学的Carl Wittwer教授等人在二十世纪九十年代提出的，快速PCR可以在很短时间内(30分钟左右)完成扩增实验，大大节省实验时间，提高工作效率和仪器使用率。更重要的是由于高速的升降温速率使退火停留的时间更短，这样引物便可在极短的时间内与模板特异结合，最终获得高特性、高质量的PCR产物。

玉米品种的DNA鉴定需要经过DNA提取、PCR扩增和电泳检测等步骤。目前DNA提取、电泳等步骤都得到了优化，采用快速碱煮DNA提取法，20分钟可以得到适用于玉米品种纯度鉴定的DNA，采用荧光毛细管电泳可以在30分钟内得到样品的数据。但PCR扩增仍然还需要2～3个小时才能完成。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种玉米DNA片段的PCR扩增方法。

本发明提供的一种玉米DNA片段的PCR扩增方法包括如下步骤：对玉米DNA片段进行PCR扩增，得到玉米DNA片段的PCR扩增产物；

所述PCR扩增的反应程序：94℃预变性2min，1个循环；94℃变性2s，60℃退火15s，72℃延伸2s，共35个循环；72℃延伸2min。

上述方法中，所述PCR扩增是在耶拿SpeedCycler 2PCR仪上进行的。

上述方法中，所述PCR扩增的引物为如下(1)-(10)中任一种：

(1)为由SEQ ID No.1所示的单链DNA和SEQ ID No.2所示的单链DNA组成的引物对1；

(2)为由SEQ ID No.3所示的单链DNA和SEQ ID No.4所示的单链DNA组成的引物对2；

(3)为由SEQ ID No.5所示的单链DNA和SEQ ID No.6所示的单链DNA组成的引物对3；

(4)为由SEQ ID No.7所示的单链DNA和SEQ ID No.8所示的单链DNA组成的引物对4；

(5)为由SEQ ID No.9所示所示的单链DNA和SEQ ID No.10所示的单链DNA组成的引物对5；

(6)为由SEQ ID No.11所示的单链DNA和SEQ ID No.12所示的单链DNA组成的引物对6；

(7)为由SEQ ID No.13所示的单链DNA和SEQ ID No.14所示的单链DNA组成的引物对7；

(8)为由SEQ ID No.15所示的单链DNA和SEQ ID No.16所示的单链DNA组成的引物对8；

(9)为由SEQ ID No.17所示的单链DNA和SEQ ID No.18所示的单链DNA组成的引物对9；

(10)为由SEQ ID No.19所示的单链DNA和SEQ ID No.20所示的单链DNA组成的引物对10。

上述方法中，所述玉米的品种为郑单958和/或先玉335。