[发明专利]通过极光激酶A的荧光原位杂交非侵入性检测膀胱癌

说明书

本申请是申请日为2008年12月12日、申请号为200880123846.7、发明名称为“通过极光激酶A的荧光原位杂交非侵入性检测膀胱癌”的发明专利申请的分案申请。

发明背景

本发明在由NationalCancerInstitute授予的授权号U01CA85078下由美国政府支持进行。美国政府具有本发明中的特定权利。

本发明一般涉及癌症检测领域。更具体而言，它涉及膀胱癌的检测。

发明概述

在一个实施方案中，本发明涉及检测患者中的膀胱癌的方法，其包括从患者的尿中分离膀胱细胞；使膀胱细胞与经标记的DNA探针杂交，其中探针识别极光激酶A(aurorakinaseA)基因的至少部分，以产生与经标记的DNA探针杂交的膀胱细胞样品；并且计数样品中的膀胱细胞数目、样品中的每个膀胱细胞中的极光激酶A基因拷贝数、和样品中具有极光激酶A基因的至少拷贝数第一阈值的膀胱细胞数目。

附图简述

下述附图构成本发明说明书的部分，并且包括在内以进一步证实本发明的特定方面。本发明通过参考与本文呈现的特定实施方案的详述组合的这些附图中的一个或多个可以得到更好地理解。

图1。极光激酶A在移行细胞癌(TCC)中的表达及其与DNA倍数性的关联。A，通过定量RT-PCR揭示的相邻尿道上皮和TCC的成对样品中的极光激酶A水平。B和C，分别通过显示近二倍体(2c)DNA含量和显著的非整倍体(6c)的肿瘤核的图像分析产生的DNA直方图。D，低级别(级别1-2)、浅表(Ta-Tla)和高级别(级别3)、侵入性(Tlb和更高的)TCC以及近二倍体和非整倍体TCC中的极光激酶A的平均表达水平。

图2。在膀胱癌细胞系中的极光激酶A表达和染色体拷贝数。A，通过定量RT-PCR，极光激酶A在膀胱癌细胞系中的表达与经培养的尿道上皮细胞(NU204)相比较。B，使用针对染色体3、7和17的着丝粒探针通过定量FISH揭示的染色体拷贝数。C，在3组膀胱癌细胞系中的极光激酶A的平均表达水平。D，在C中显示的3组膀胱癌细胞系中，用针对染色体3、7和17的着丝粒探针通过FISH揭示的癌细胞系中的平均染色体拷贝数。

图3。使用抗GFP抗体用包含野生型极光激酶A插入片段的腺病毒载体转染的SV40尿道上皮细胞中的极光激酶A-GFP融合蛋白的异位表达。A，显示极光激酶A-GFP融合蛋白的表达的Western印迹分析(上图)。用DAPI作为核复染剂显示极光激酶A-GFP融合蛋白的异位表达的免疫荧光分析(下图)。用不含极光激酶A插入片段的腺病毒载体感染的细胞的免疫荧光图像(a，b)。用红色滤光器获得的图像揭示2个中心体(a)。用绿色滤光器获得的图像揭示没有极光激酶A-GFP融合蛋白的异位表达(b)。用包含极光激酶A插入片段的腺病毒载体感染的细胞的免疫荧光图像(c，d)。用红色滤光器获得的图像显示用抗微管蛋白抗体揭示的中心体倍增(红色)(c)。用绿色滤光器获得的图像显示在中心体中异位表达的极光激酶A-GFP蛋白质(d)。B，通过异位表达的极光激酶A诱导的中心体和染色体拷贝数的定量评估。C，与用PI复染剂揭示的DNA含量(红色荧光)相关的异位表达的极光激酶A-GFP蛋白质(绿色荧光)的双重荧光FACS分析。在用包含野生型极光激酶A插入片段的腺病毒载体感染后的双重荧光分布图(右图)。用空腺病毒载体感染的细胞的对照分布图(右图)。与对照相比较(左图)，注意到在指定为A和B的分布图区域中的非整倍体(aneuploid)细胞的增加(右图)。D，通过C中显示的双重荧光FACS分析和软琼脂上的集落形成揭示的非整倍体细胞的定量评估。Ad/对照：用不含极光激酶A插入片段的腺病毒载体感染的细胞，Ad/极光激酶AGFP：用包含野生型极光激酶A的腺病毒载体转染的细胞，MOI：感染复数。