[发明专利]绿壳蛋鸡啄羽相关基因检测用试剂盒及其实现方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种生物基因领域的技术，具体是一种检测绿壳蛋鸡啄羽基因rs13640917C/T的试剂盒及其实现方法。

背景技术

啄羽(feather pecking，FP)是蛋鸡饲养中尤其是高密度大群饲养中常见的问题。在禽类饲养业中，啄羽导致鸡群的死亡率上升、饲料消耗增加以及动物福利下降，鸡群一旦部分出现啄羽现象就很容易蔓延到整个鸡群，形成啄羽癖，给禽类饲养业带来了巨大的经济损失。鸡群严重的啄羽行为可造成鸡只羽毛覆盖减少，羽毛损伤掉落的鸡，热量散失加快，为了维持正常的体温，采食量增加，比正常时增加27％～30％(Tauson，R.，Cages:how could they be improved，in The laying hen and its environment.1980，Springer.p.269‐304.)，更严重的可导致鸡只疼痛，使整个鸡群采食量下降、饲料转化率降低，导致50％以上的死亡率，对蛋鸡饲养者的经济效益影响巨大。温和型啄羽也会对蛋重产生显著影响(Buitenhuis，A.，et al.，Genetic and phenotypic correlations between feather pecking behavior，stress response，immune response，and egg quality traits in laying hens.Poultry science，2004.83(7):p.1077‐1082)，还会影响国内淘汰蛋鸡的价格，减少收入。

长期以来国内外大都使用断喙的方式减少鸡只啄羽，即在鸡只7‐10日龄(热刀断喙)或0日龄(红外断喙)使用机器将喙的前部1/3或1/2处去除，但是无论哪种断喙方式都会使鸡只产生应激。随着人们对动物福利问题日益关注，断喙这种会对鸡造成应激的行为受到更大的质疑，有些国家和地区已经开始尝试禁止断喙。所以，从长远来看，随着分子手段在家禽中的深入应用，对蛋鸡的啄羽行为，应该注重通过分子辅助遗传育种手段生产出低啄羽行为的蛋鸡品系来加以控制。

根据Van der Poel等(2010)研究发现，四号染色体上的HTR2C基因上的一个SNP与鸡啄羽行为有直接遗传相关，并且相关极显著(Van der Poel，et al.，Across‐line SNP association study for direct and associative effects on feather damage in laying hens.Behavior genetics，2010.40(5):p.715‐727.)。随着分子生物学技术和鸡基因组研究的飞快发展，育种更准确、进展更快的分子育种已经提上历史舞台，从分子生物学角度研究鸡啄羽行为的机理，并研究候选基因和分子遗传标记，运用标记辅助选择的方法可以快速、高效的达到育种的目的。

发明内容

本发明针对现有技术存在的上述不足，提出一种绿壳蛋鸡啄羽相关基因检测用试剂盒及其实现方法，能够快速确定待测鸡只为野生型纯合体、突变型纯合体还是杂合体。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明涉及一种绿壳蛋鸡啄羽相关基因检测用试剂盒，包括：

1)用于PCR扩增以检测rs13640917基因用的引物对，即上游引物U和下游引物D，其中：

U如Seq ID No.1所示，即：5’‐CACAATGACCACGACAACG‐3’；

D如Seq ID No.2所示，即：5’‐ATCTCACGGAACCCAAATG‐3’；

2)限制性核酸内切酶AcuI，其序列为：

5’‐CTGAAG(N)16↓‐3’以及3’‐GACTTC(N)14↑‐5’

其中箭头所指位置为酶切位点，N表示任何碱基。

本发明涉及上述试剂盒的实现方法，对待测鸡只的包括rs13640917C/T突变在内的基因组DNA为模板，采用所述引物进行PCR扩增，再用限制性核酸内切酶AcuI酶切所得的PCR扩增产物，电泳检测所得到的酶切产物并判断待测鸡只的rs13640917位的脱氧核糖核苷酸是野生型C或突变型T。