[发明专利]使用微粒和独特探针组筛选结合相互作用的方法

说明书

本发明涉及使用多组微粒筛选结合相互作用的方法，其中所述组具有相同的可鉴别特征，并且其中多组中的一组包括微粒亚组，所述亚组呈现至少一种作为生物样品中靶分子结合对象的独特探针。具体来说，本发明提供使用这些多组微粒在供体组织或受体组织中检测组织分型抗原的方法。

本申请是2008年5月1日提交的题为“使用微粒和独特探针组筛选结合相互作用的方法”的国家申请号为200880022471.5(PCT/US2008/062194)的发明专利申请的分案申请。

本申请要求2007年5月3日提交的美国临时专利申请60/915,920的优先权，该专利申请的全文以引用方式并入本文。

发明领域

本发明涉及使用多组微粒筛选结合相互作用的方法，其中所述组具有相同的可鉴别特征并且其中多组中的一组包括微粒亚群，所述亚群呈现至少一种独特的探针，该探针用作生物样品中靶分子的结合对象(partner)。具体来说，本发明提供使用这些多组微粒检测供体组织或受体组织中的组织分型抗原的方法。

发明背景

一种此类组织分型抗原是人白细胞抗原(HLA)。个体可能在怀孕期间或通过输血或之前的器官移植而对HLA抗原敏感。测定对HLA等位基因敏感性的测试涉及组织和器官移植，其中受体中存在抗供体HLA抗原的抗体(供体特异性交叉配血(crossmatch))是高风险移植排斥的前兆。在移植领域中标准的实施方式是测试抗一系列经选择代表人群的HLA抗原的所有可能受体，并检测血清反应性的HLA等位基因的百分比。在这个系列反应性抗体(PRA)中，患者血清抗正常人群中存在的高百分比HLA等位基因的测试反应是高风险移植排斥的前兆。

HLA基因座本质上是高度多态的。如Nomenclature for Factors of the HLASystem 2000(Hum.Immunol.；62(4)：419-68)，2001)中所公开，有124种HLA-A等位基因、258种HLA-B等位基因、74种HLA-C等位基因、221种HLA-DRB1等位基因、19种DRB3等位基因、89种DRB4等位基因、14种DRB5等位基因、19种DQA1等位基因和39种DQB1等位基因，还不断发现新的等位基因。作为这种快速过程的证实，世界卫生组织HLA因子命名委员会(WHOnomenclature Committee for Factors of the HLA System)(www.anthonynolan.com/HIG/)2007年4月的修订本中显示有545种HLA-A等位基因、895种HLA-B等位基因、307种HLA-C等位基因、8种HLA-E等位基因、12种HLA-H等位基因、9种HLA-J等位基因、6种HLA-K等位基因、4种HLA-L等位基因、4种HLA-P等位基因、3种HLA-V等位基因、3种DRA等位基因、494种DRB1等位基因、1种DRB2等位基因、44种DRB3等位基因、13种DRB4等位基因、18种DRB5等位基因、3种DRB6等位基因、2种DRB7等位基因、10种DRB8等位基因、1种DRB9等位基因、34种DQA1等位基因、83种DQB1等位基因、23种DPA1、126种DPB1等位基因、4种DMA等位基因、7种DMB等位基因、12种DOA等位基因和9种DOB等位基因。

所有的HLA-A、-B和-C等位基因都具有类似的序列。对于DRB1、DRB3、DRB4和DRB5序列情况也相同。由于这些相似性，极为通常的情况是当引物对用于实施聚合酶链式反应序列特异性引物(PCR SSP)时，将扩增两种或更多种等位基因，或者在诊断性序列特异性寡核苷酸探针检测(SSO)体系中，两种或多种等位基因将杂交。因此，对于各个等位基因，要具有独特的PCR-SSP或检测-SSO模式，必须使用许多对引物或探针。此外，在HLA分型中诊断杂交SSO探针的使用会被HLA等位基因所具有的高水平的同源性所混淆。因此，许多现有的分型方法(如Bugawan等人，Tissue Antigens 44：137-147(1994)中的那些)缺乏HLA分型和其他应用所需的准确度。