[发明专利]一种利用线粒体DNA鉴别牛羊肉中猫肉的LAMP检测方法有效
| 申请号： | 201510411176.0 | 申请日： | 2015-07-14 |
| 公开（公告）号： | CN105039540B | 公开（公告）日： | 2018-07-03 |
| 发明（设计）人： | 刘少宁;陈智;高迎春;张琦;尹菲菲 | 申请（专利权）人： | 山东省兽药质量检验所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 张菡 |
| 地址： | 250022 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 猫肉 肉品 线粒体DNA 鉴别 分子生物学检测 肉眼观察结果 恒温水浴锅 动物源性 恒温水浴 结果判定 实验仪器 荧光染料 传统PCR 终产物 橘黄色 检测 染料 构建 后向 引物 | ||
1.一种利用线粒体DNA鉴别牛羊肉中猫肉的LAMP检测方法，其特征在于，
以待测肉品的DNA作为模板、以MF3、MB3、MFIP、MBIP为引物构建LAMP检测体系；LAMP检测体系于64℃恒温水浴中反应40min，反应结束后向反应液中加入1 uL荧光染料SYBRGREEN Ⅰ；若反应液变成绿色，说明待测肉品中存在猫肉；若为橘黄色，则待测肉品中不存在猫肉；
所用引物如下：
MF3: CACTTCCTAGGCCTGTCC，如SEQ ID NO.1所示，
MB3: ATGTGTGGTACGGAGGAG，如SEQ ID NO.2所示，
MFIP:GAAAGAGCCCATTGAGGAAATCGTAGACGTTATTCTGACTATCCAGAT，如SEQ ID NO.3所示，
MBIP:GTTTTCATAGTGTGAGAAGCTTTCGCAAGATTAGTTGTGGTTAGTTCT，如SEQ ID NO.4所示；
所述LAMP检测体系，总体积为25uL；其组成如下
10umol/L的MF3、MB3各0.5uL，10umol/L 的MFIP、MBIP各4uL，2.5mmol/L的 dNTP 4uL，50mmol/L的 MgSO4 2uL，5mol/L的Betaine2.5uL，Bst DNA聚合酶1uL，10×Thermo buffer2.5uL，模板2uL，余量为超纯水。
2.一种利用线粒体DNA鉴别牛羊肉中猫肉的LAMP检测方法所用检测试剂，含有如下引物：
MF3: CACTTCCTAGGCCTGTCC，如SEQ ID NO.1所示，
MB3: ATGTGTGGTACGGAGGAG，如SEQ ID NO.2所示，
MFIP:GAAAGAGCCCATTGAGGAAATCGTAGACGTTATTCTGACTATCCAGAT，如SEQ ID NO.3所示，
MBIP:GTTTTCATAGTGTGAGAAGCTTTCGCAAGATTAGTTGTGGTTAGTTCT，如SEQ ID NO.4所示。
3.一种利用线粒体DNA鉴别牛羊肉中猫肉的LAMP检测方法所用检测试剂盒，含有10umol/L的MF3、MB3各0.5uL，10umol/L 的MFIP、MBIP各4uL，2.5mmol/L的 dNTP 4uL，50mmol/L的 MgSO4 2uL，5mol/L的Betaine2.5uL，Bst DNA聚合酶1uL，10×Thermo buffer2.5uL；
其中：
MF3: CACTTCCTAGGCCTGTCC，如SEQ ID NO.1所示，
MB3: ATGTGTGGTACGGAGGAG，如SEQ ID NO.2所示，
MFIP:GAAAGAGCCCATTGAGGAAATCGTAGACGTTATTCTGACTATCCAGAT，如SEQ ID NO.3所示，
MBIP:GTTTTCATAGTGTGAGAAGCTTTCGCAAGATTAGTTGTGGTTAGTTCT，如SEQ ID NO.4所示。
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